1、目的：探討培養(yǎng)時間、取材來源、保存方式及培養(yǎng)體系成分對CIKs細胞體外細胞擴增倍數(shù)、免疫表型及腫瘤殺傷活性的影響，為腫瘤治療合理科學使用CIKs細胞回輸提供實驗支持。方法：(1)原代培養(yǎng)肺癌、乳腺癌細胞作為靶細胞備用。(2)健康成人外周血分離單個核細胞，分別以常規(guī)CIKs誘導體系、加入腫瘤細胞培養(yǎng)上清液體系和加入DC-CIKs培養(yǎng)上清液體系進行細胞培養(yǎng)。特定時間點檢測細胞擴增倍數(shù)、相關(guān)免疫表型及腫瘤殺傷活性。(3)健康足月產(chǎn)婦胎兒臍血分

2、離單個核細胞以常規(guī)誘導體系和加入腫瘤細胞上清液體系進行培養(yǎng)，按(2)中時間及方法進行相關(guān)指標檢測。(4)冷凍保存兩種單個核細胞，并在第7、14、21天復蘇，常規(guī)誘導體系培養(yǎng)后測定相關(guān)指標。(5)常規(guī)體系培養(yǎng)14天的CIKs冷凍復蘇后進行相關(guān)指標檢測。 結(jié)果：(1)常規(guī)培養(yǎng)CIKs細胞培養(yǎng)第14天對腫瘤細胞產(chǎn)生明顯殺傷作用，21天殺傷活性進入高峰期，35天呈下降趨勢；(2)臍血CIKs培養(yǎng)前兩周CD3+CD56+細胞比例，腫瘤殺傷

3、活性高于外周血組，21至28天時兩者無統(tǒng)計學差別，35天臍血組無下降趨勢；(3)加入DC-CIK細胞培養(yǎng)上清液的健康成人來源CIKs細胞CD3+CD56+細胞比例、腫瘤殺傷活性高于常規(guī)培養(yǎng)的同來源CIKs；(4)培養(yǎng)時加入腫瘤培養(yǎng)上清液的CIKs細胞擴增倍數(shù)，CD3+CD56+細胞比例，腫瘤細胞殺傷活性下降；(5)3周內(nèi)凍存單個核細胞擴增的CIKs與常規(guī)培養(yǎng)CIKs各項特征無明顯差別；培養(yǎng)14天的CIKs凍存后，隨凍存時間延長腫瘤殺傷活

4、性下降。結(jié)論：1、CIKs細胞對于肺癌、乳腺癌細胞在體外均具有殺傷活性，兩者間無明顯差別，一定時間范圍內(nèi)，延長培養(yǎng)時間可提高CD3+CD56+細胞比例和CIKs腫瘤殺傷活性；2、臍血來源CIKs在體外腫瘤殺傷活性穩(wěn)定，腫瘤殺傷活性高峰期持續(xù)時間長。3、DC-CIKs細胞培養(yǎng)上清液為條件培養(yǎng)基可提高外周血來源CIKs的CD3+CD56+細胞比例及其腫瘤殺傷活性。4、腫瘤細胞培養(yǎng)上清液在培養(yǎng)過程中顯著降低CIKs的擴增倍數(shù)和腫瘤殺傷活性。5