1、目的:鑒定CTL識(shí)別的HLA-A2限制性人卵巢癌腫瘤相關(guān)抗原(OVA66)表位.方法:根據(jù)表位預(yù)測(cè)軟件的預(yù)測(cè)結(jié)果,選取OVA66蛋白氨基酸序列中兩個(gè)與HLA-A2分別呈高、低親和力的肽分子即表位L235(FLPDHINIV)、L236(VLTTKNLFL).體外應(yīng)用IL-4、GM-CSF、IFN-γ和CD40L誘導(dǎo)HLA-A2+外周血單核細(xì)胞生成樹(shù)突狀細(xì)胞(DC),經(jīng)FACS檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志加以證實(shí).CD8<'+>磁珠分選PBMC得CD

2、8<'+>T細(xì)胞,FACS鑒定其純度.接受抗原肽脈沖的抗原提呈細(xì)胞(APC)DC,經(jīng)3000rad X射線照射后,與CD8+T細(xì)胞混合培養(yǎng).一周后以自體PBMC為APC,接受抗原肽脈沖并經(jīng)X射線照射后刺激CD8<'+>T細(xì)胞1次,每隔7天重復(fù)1次,共3次后作為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL),應(yīng)用乳酸脫氫酶(LDH)釋放分析法,檢測(cè)CTL對(duì)不同靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng).酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)檢測(cè)CTL中分泌IFN-γ的T細(xì)胞頻率.結(jié)論:體外