1、目的：探討血小板反應(yīng)蛋白Ⅰ(TSP-1)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF—β1)誘導(dǎo)的大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成過程中的作用，研究TSP-1與VEGF的關(guān)系，為防治心肌纖維化提供理論依據(jù)。 方法：用消化、差速貼壁法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，抗纖維連接蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。實(shí)驗(yàn)分為五組： ①對照組，未加任何誘導(dǎo)劑培養(yǎng)24小時。

2、 ②TGF-β1濟(jì)量依賴組，分別加入1Ong/ml、20ng/ml、30ng/mlTGF—β1培養(yǎng)24小時。 ③TGF-β 1時間依賴組，加入TGF-β1分別培養(yǎng)12、24、48小時。 ④反義寡核苷酸組，加入TGF-β1和TSP-1反義寡核苷酸培養(yǎng)24小時。 ⑤正義寡核苷酸組加入TGF-β1和TSP-1正義寡核苷酸培養(yǎng)24小時后。分別用MTT比色法檢測心肌成纖維細(xì)胞(CFs)生長數(shù)目、羥脯氨酸法測定膠原蛋白含量

3、。用半定量RT—PCR檢測VEGFmRNA、TSP—1mRNA表達(dá)。VEGFmRNA相對表達(dá)量及TSP-1mRNA相對表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1、心肌成纖維細(xì)胞細(xì)胞增殖和膠原蛋白：與對照比，TGF-β1誘導(dǎo)組的心肌成纖維細(xì)胞MTT反應(yīng)A值及膠原蛋白含量均顯著高于對照組(P＜0.01)。TSP-1反義寡核苷酸+TGF-β1組的MTT反應(yīng)A值及膠原蛋白合成量值均明顯低于TGF-β1組(P＜0.01)。TSP-1正義寡

4、核苷酸組與TGF-β1組之間無顯著差異(P＞0.05)。 2、mRNA的表達(dá)： (1).VEGFmRNA表達(dá)：①10ng/mlTGF-β1組和培養(yǎng)12小時組中VEGFmRNA的相對表達(dá)量比對照組顯著增強(qiáng)(P＜0.01)②20、30ng/mlTGF—β1組和24小時、48d,時組VEGFmRNA的相對表達(dá)量比對照組顯著降低(P＜0.01)。③TSP-1反義寡核苷酸組比20ng/ml TGF-β1組VEGFmRNA的相對表達(dá)

5、量顯著增高(P＜0.01)。④TSP-1正義寡核苷酸組與20ng/mlTGF-β1組比較，VEGFmRNA的相對表達(dá)量無明顯變化(P＞0.05)。 (2).TSP—ImRNA表達(dá)：①1Ong/ml TGF-β1組和培養(yǎng)12小時組中TSP-1mRNA的相對表達(dá)量比對照組無明顯差別(P＞0.05)。②20、30ng/mlTGF-β1組和24小時、48小時組TSP—1mRNA的相對表達(dá)量比對照組顯著增高(P＜0.01)。③TSP-1反

6、義寡核苷酸組與20ng/ml TGF-β1組比較TSP-1mRNA的相對表達(dá)量顯著下降(P＜0.01)。④TSP-1正義寡核苷酸組較20ng/ml TGF-β1組TSP-1mRNA的相對表達(dá)量無明顯變化(P＞0.05)。 (3).相關(guān)性分析結(jié)果：TGF-β1時間和濃度依賴組VEGFmRNA和TSP—1mRNA表達(dá)量相關(guān)性分析顯示，r值分別是-0.537和-0.714(P＜0.01)。說明VEGF和TSP—1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。