1、研究背景:
　　 目前，肥胖及2型糖尿病已經(jīng)成為我國面臨的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題。作為代謝異常性疾病二者存在相近的發(fā)病基礎(chǔ)，脂質(zhì)異常沉積與胰島素抵抗是其共同土壤[1]。盡管多種遺傳因素引起肥胖及胰島素抵抗，但環(huán)境因素中最主要的是長期能量攝入超過消耗，導(dǎo)致體內(nèi)脂肪過多蓄積，引起肥胖及脂質(zhì)代謝紊亂[2，3]。肥胖在細(xì)胞層面上主要表現(xiàn)為已存在的脂肪細(xì)胞體積的肥大和由前脂肪細(xì)胞分化而來的脂肪細(xì)胞數(shù)量的增多。研究表明[4-6]，脂肪細(xì)胞體積的肥

2、大以及由前脂肪細(xì)胞分化而來的脂肪細(xì)胞數(shù)量的增多在成人肥胖的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮著重要作用。然而，這兩種變化對脂質(zhì)及糖代謝的作用有著顯著的差別。脂肪細(xì)胞體積的肥大與脂質(zhì)代謝紊亂及胰島素抵抗密切相關(guān);而脂肪細(xì)胞數(shù)量的增多（小體積脂肪細(xì)胞）則有助于改善高脂血癥，增加胰島素敏感性。胰高糖素肽-1(glucagon-likepeptide-1，GLP-1)是由腸L細(xì)胞產(chǎn)生的目前已知作用最強(qiáng)的腸促胰島素分泌肽，除了調(diào)控血糖之外，還具有調(diào)節(jié)食欲、血壓

3、、血脂，改善心功能、保護(hù)血管內(nèi)皮功能等多重生物學(xué)功能[7]。研究證明[8-10]，GLP-1能夠上調(diào)脂肪細(xì)胞表面胰島素受體(IR-β)及胞內(nèi)胰島素底物(IRS-1)的數(shù)量，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子4(GLUT-4)的表達(dá)，抑制脂肪細(xì)胞中炎癥通路激活等改善脂肪細(xì)胞體積的肥大，進(jìn)而改善胰島素抵抗;然而，GLP-1對前脂肪細(xì)胞的分化的影響尚有爭議，其能否促進(jìn)小體積脂肪細(xì)胞的形成尚缺乏足夠研究。本實驗以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為實驗對象，在其分化過程中給

4、予重組人GLP-1進(jìn)行干預(yù)，研究GLP-1對前脂肪細(xì)胞分化的影響及其調(diào)控機(jī)制，以期為肥胖的防治提供新的作用靶點(diǎn)。
　　 研究目的:
　　 1.觀察GLP-1對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中脂肪標(biāo)志性蛋白LPL、aP2及轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ、C/EBPα表達(dá)的影響。
　　 2.觀察GLP-1對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中脂質(zhì)聚集以及脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響。
　　 3.初步探討GLP-1發(fā)揮上述作用的分子機(jī)

5、制。
　　 研究方法:
　　 1.3T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)與分化:在無菌條件下培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，采用傳統(tǒng)“雞尾酒”法來誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化。
　　 2.給予3T3-L1前脂肪細(xì)胞不同濃度的GLP-1進(jìn)行干預(yù)，用MTT法檢測其對細(xì)胞活力的影響，選取合適的濃度范圍。
　　 3.RT-PCR及Western-blot檢測脂肪細(xì)胞脂肪標(biāo)志性蛋白LPL、aP2及轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ、C/EBPα的表達(dá)。

6、
　　 4.油紅O染色檢測3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化第8天細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)聚集，用ImageProplus5.02軟件分析脂肪細(xì)胞體積和數(shù)量的變化。
　　 5.RT-PCR檢測誘導(dǎo)分化第8天時解偶聯(lián)蛋白-1(UCP-1)和肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶-1(CPT-1A)的mRNA表達(dá)。
　　 6.Western-blot檢測Akt、P38、ERK1/2信號通路的變化。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.GLP-1顯著促

7、進(jìn)脂肪細(xì)胞標(biāo)志性蛋白LPL、aP2和轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ、C/EBPα的mRNA水平，呈濃度依賴性及時間依賴性(P＜0.05)。
　　 2.與對照組相比，GLP-1顯著促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ和脂肪細(xì)胞標(biāo)志性蛋白aP2的蛋白表達(dá)，呈濃度依賴性及時間依賴性(P＜0.05)。
　　 3.與對照組相比，GLP-1組pAkt的蛋白表達(dá)水平顯著增加(P＜0.05)，而pP38和pERK1/2的蛋白水平未見顯著變化。
　　

8、4.油紅O染色結(jié)果顯示，100nMGLP-1顯著增加小體積脂肪細(xì)胞的形成(P＜0.05)。
　　 5.與對照組和其他濃度組相比，100nMGLP-1組脂肪細(xì)胞中CPT-1A的mRNA表達(dá)水平顯著增加(P＜0.05)，而UCP-1的mRNA表達(dá)無顯著變化。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.在3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中，GLP-1呈劑量及時間依賴性的促進(jìn)PPAR-γ、C/EBPα、LPL和aP2的表達(dá)。