1、該課題研究采用Szoka逆向蒸發(fā)法制備陽離子脂質(zhì)體,根據(jù)不同的(+/-)電荷比與端粒酶的ASON形成復合物,再與Sendai病毒融合,得到陽離子膜融合脂質(zhì)體(cationic fusogenic liposomes,CFL)與ASON的復合物.CL和CFL在透射電子顯微鏡下顯示形態(tài)圓整,大小均勻.經(jīng)Zetasizer3000HS激光衍射粒度分析儀測得CFL的粒徑分布良好,平均粒徑分別為255.2 nm,ξ電位為37.5 mV.載藥CFL

2、的粒徑和ξ電位與復合物的(+/-)電荷比有關.超濾法測得的CFL載藥率隨著電荷比增加而增加,當磷脂/ASON(+/-)電荷比為4:1時,CFL的載藥率為89.1﹪.用20﹪變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分析ASON的降解表明,游離的ASON在10 min內(nèi)迅速被DNase I降解,而CFL/ASON復合物在4 h內(nèi)幾乎不降解.當用去污劑預先破壞CFL的磷脂雙分子層后,降解情況與游離的ASON一致.故推測ASON不是單純吸附在CFL表

3、面而是包裹于其中.穩(wěn)定性考察表明,空白CFL于4℃條件存儲1個月后,其pH值、粒徑未發(fā)生明顯改變,但3個月后,粒徑和pH值均有變化.載藥CFL的體外釋放緩慢,釋藥90﹪以上需要5天.CFL介導的互補于端粒酶RNA的ASON可抑制7404肝癌細胞增殖,并呈作用時間和劑量的依賴性.免疫組化結(jié)果表明:CFL/ASON復合物組的p53蛋白和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)的表達量