羅布麻葉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析以及與半乳凝集素的相互作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、羅布麻(Apocynum venetum Linn)是我國的傳統(tǒng)中藥,其葉具有降血壓、降血脂、肝保護和抗抑郁等活性?,F(xiàn)如今,有關(guān)羅布麻葉的文獻報道近20篇,主要集中在多酚類及糖苷類,尚缺乏對羅布麻葉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析和生物活性的報道。
   本文對羅布麻葉多糖進行了系統(tǒng)的分離純化,進一步研究了各級分的單糖組成,理化性質(zhì)及分子量,并對獲得的均一多糖級分的結(jié)構(gòu)特征進行了詳細的分析。
   干燥的羅布麻葉經(jīng)過熱水煮提、乙

2、醇沉淀和Sevag法脫蛋白得到羅布麻葉水溶性粗多糖ALP(5.8%),其單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,摩爾比為0.29:1.0:0.55:3.88:1.12:2.20:1.29。ALP經(jīng)過DEAE-Cellulose柱層析分級,得到一個中性糖級分ALPN和兩個酸性糖級分ALPA-1和ALPA-2。這三個級分均進行了含量、組成以及分子量的分析。ALPA-I和ALPA-2進一步通過Sepharo

3、se CL-6B分級得到兩個較均一的級分ALPA-1a和ALPA-2a。
   通過凝膠滲透色譜和高效液相色譜驗證ALPA-la和ALPA-2a兩者為均一的多糖級分,ALPA-la主要由半乳糖(37.55%)、阿拉伯糖(36.92%)、鼠李糖(9.93%)及半乳糖醛酸(8.2%)組成,其分子量為5.0x104 Da,半乳糖和阿拉伯糖占總糖的50%以上,同時Rha/GalA和Gal/Ara均接近1:l。利用13C核磁共振分析發(fā)現(xiàn),

4、ALPA-1a是以a-D-GalpA-(1,2)-a-L-Rhap為主鏈,帶有阿拉伯半乳聚糖側(cè)鏈的多糖,推測其為I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果膠。而ALPA-2a主要由鼠李糖(7.38%)、半乳糖醛酸(67.29%)、葡萄糖(8.29%)、半乳糖(7.07%)和阿拉伯糖(5.43%)組成,其中半乳糖醛酸的比例占總糖的70%左右,其分子量為1.8xl04Da。應(yīng)用紅外光譜、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解和13C核磁共振波譜法(

5、13CNMR)對ALPA-2a進行結(jié)構(gòu)分析。研究發(fā)現(xiàn),ALPA-2a中的半乳糖醛酸主要以a-D-(1,4)連接構(gòu)成主鏈,還有少量鼠李糖以(1,2)連接方式連接在側(cè)鏈,同時,側(cè)鏈的Ara和Gal以arabino-(3,6)-galactan方式連接。根據(jù)結(jié)果推測:ALPA-2a為富含有聚半乳糖醛酸(HG)結(jié)構(gòu)域的果膠類多糖,并帶有少量的RG-I型結(jié)構(gòu)域。
   在血細胞凝集阻抑實驗中,ALPA-lb和ALPA-2a表現(xiàn)出明顯的抑制

6、血細胞凝集的活性,即這兩個HG型果膠級分與半乳凝集素-3(Galectin-3)有很強的結(jié)合能力。此外,RG-I型果膠級分ALPA-la與Galectin-3也具有較強的結(jié)合能力,而AG型果膠級分ALPN與Galectin-3幾乎沒有結(jié)合能力。比較各級分的結(jié)構(gòu)特征,我們推測:從羅布麻葉分離得到的果膠中HG型結(jié)構(gòu)級分與Galectin-3的結(jié)合能力強于RG-I型級分,而具AG型結(jié)構(gòu)的果膠級分幾乎不與Galectin-3結(jié)合,這可能是由于H

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