1、血小板輸注在臨床上的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，提高血小板體外保存時(shí)間和質(zhì)量成為輸血醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。冷凍干燥法具有室溫下長(zhǎng)期保存、復(fù)水后迅速恢復(fù)活性、重量輕便于運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，為血小板的長(zhǎng)期保存提供了一種理想的方法。但是，目前血小板的冷凍干燥保存技術(shù)還有許多未解決的問(wèn)題，離臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用還有很大的距離。本文在國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“超聲波在生物材料玻璃化保存中的應(yīng)用”（項(xiàng)目編號(hào)：50076039）及衛(wèi)生部科學(xué)研究基金項(xiàng)目“血小板凍干保存方法的研究”（

2、項(xiàng)目編號(hào)：WKJ2005-2-037）的資助下，采用冷凍干燥的方法保存血小板，以提高冷凍干燥血小板的存活率為目標(biāo)，進(jìn)行了以下研究工作： 自行研制了一套實(shí)驗(yàn)型冷凍干燥裝置，首次將新型自動(dòng)復(fù)疊循環(huán)用于冷凍干燥裝置的制冷系統(tǒng)，成功地用單級(jí)壓縮機(jī)系統(tǒng)使擱板溫度達(dá)到-60℃，冷阱溫度達(dá)到-80℃。該裝置溫度、壓力、質(zhì)量的測(cè)量和控制功能齊全，彌補(bǔ)了現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)型凍干裝置存在的不足，為血小板的冷凍干燥實(shí)驗(yàn)提供了必要的實(shí)驗(yàn)條件。 采用差示掃

3、描量熱技術(shù)測(cè)量血小板凍干懸浮液和凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，并對(duì)影響血小板凍干懸浮液和凍干樣品玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的因素進(jìn)行分析，為制定合理的凍干工藝提供依據(jù)。牛血清白蛋白的加入提高了凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。海藻糖濃度的增加使凍干懸浮液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度顯著升高，凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度略有升高。海藻糖、乳糖、麥芽糖凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度較高且相差不大，蔗糖次之，而葡萄糖凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度遠(yuǎn)低于其他幾

4、種糖。血小板濃度對(duì)凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度幾乎沒(méi)有影響。除了含20％葡萄糖的配方外，血小板凍干配方溶液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度最低為-36.2℃，凍干粉的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度最低為35.3℃，因此，確定在血小板冷凍干燥的實(shí)驗(yàn)中凍結(jié)溫度為-40℃，升華干燥溫度為-38℃，貯存溫度為低于30℃的室溫。 采用熱穿孔方法通過(guò)溫度控制的液相內(nèi)吞途徑將海藻糖載入血小板。在此基礎(chǔ)上，檢驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)海藻糖和細(xì)胞外保護(hù)劑在血小板凍干保存中分別所起的作用

5、。在細(xì)胞外海藻糖濃度為50mmol/L，孵化溫度37℃，孵化時(shí)間4h的優(yōu)化條件下，血小板內(nèi)部的海藻糖濃度達(dá)到約15mmol/L。在細(xì)胞內(nèi)海藻糖濃度為15mmol/L，細(xì)胞外保護(hù)劑為1％牛血清白蛋白及1％海藻糖的情況下凍干血小板，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了僅細(xì)胞外保護(hù)劑能夠得到較高的凍干血小板數(shù)值恢復(fù)率，細(xì)胞外保護(hù)劑在血小板凍干保存過(guò)程中起到主要的保護(hù)作用，而15mmol/L細(xì)胞內(nèi)海藻糖自身不足以提供血小板的凍干保護(hù)，只是在細(xì)胞外保護(hù)劑提供主要保護(hù)作

6、用的基 礎(chǔ)上起輔助作用。這一結(jié)果為簡(jiǎn)化血小板凍干操作工藝的研究提供了方向。 研究保護(hù)劑系統(tǒng)、降溫速率、血小板濃度三種影響因素對(duì)血小板冷凍干燥保存效果的影響，通過(guò)比較冷凍干燥保存后血小板的恢復(fù)率，確定這三種影響因素的優(yōu)化參數(shù)。在實(shí)驗(yàn)條件范圍內(nèi)，最佳凍干保護(hù)劑組合是1％牛血清白蛋白和20％海藻糖，最佳凍結(jié)速度約為10℃/min，最佳凍干血小板初始濃度范圍0.5×10<'9>～2.3×10<'9>個(gè)/ml。優(yōu)化條件下，凍干復(fù)水后