1、煙粉虱Bemisia tabaci(Hemiptera: Aleyrodidae)屬半翅目粉虱科，是一種刺吸式韌皮部取食昆蟲。近年來，隨著Middle East Asia Minor1(MEAM1)和Mediterranean(MED)煙粉虱逐漸入侵到我國(guó)多個(gè)地區(qū)，嚴(yán)重威脅著我國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。煙粉虱對(duì)植物的危害主要分為直接取食危害和傳播病毒病等間接危害，煙粉虱對(duì)植物的直接和間接危害都與煙粉虱的取食密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，刺吸式昆蟲在取食過程中

2、需要分泌唾液以幫助其刺探、取食，由唾液腺分泌的唾液效應(yīng)因子可以幫助昆蟲調(diào)控植物的防御反應(yīng)。目前尚未有關(guān)于煙粉虱唾液效應(yīng)蛋白的研究報(bào)道，關(guān)于唾液蛋白如何參與煙粉虱-植物互作的機(jī)理尚不明確。
　　本研究從MED煙粉虱唾液腺轉(zhuǎn)錄組中篩選了兩個(gè)疑似唾液效應(yīng)因子基因，分別是BtQ0F1和BtQ2477，針對(duì)這兩個(gè)基因從序列分析、生物測(cè)定以及對(duì)植物防御基因的影響等方面初步探討了它們?cè)跓煼凼?植物互作中的作用。結(jié)果如下:
　　(1)煙粉虱

3、BtQ0F1基因的序列分析及初步功能探究
　　BtQ0F1基因編碼一個(gè)含有259個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分子量約為25.89kDa，等電點(diǎn)為4.40。預(yù)測(cè)該基因編碼的蛋白無跨膜區(qū)，但是含有一個(gè)由24個(gè)氨基酸殘基編碼的信號(hào)肽，具有典型的分泌蛋白結(jié)構(gòu)。在GenBank中未檢索到任何同源基因或保守的功能結(jié)構(gòu)域。
　　通過浸潤(rùn)法在煙草上瞬時(shí)表達(dá)BtQ0F1基因，3天后煙粉虱的存活率顯著高于對(duì)照。通過飼喂dsRNA干擾煙粉虱BtQ

4、0F1基因，發(fā)現(xiàn)沉默BtQ0F1基因不利于煙粉虱的存活，在棉花上的存活率顯著低于對(duì)照。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)BtQ0F1基因?qū)煵菹嚓P(guān)防御基因的影響，發(fā)現(xiàn)在煙草中瞬時(shí)表達(dá)BtQ0F1基因可以幫助煙粉虱抑制植物的JA、BR和SA信號(hào)通路。對(duì)BtQ0F1進(jìn)行了原核表達(dá)及多抗制備，Western Blot結(jié)果表明，以制備的anti-BtQ0F1兔多克隆抗體為一抗可以在MED煙粉虱蟲體中檢測(cè)到目的條帶，為后續(xù)進(jìn)一步驗(yàn)證BtQ0F1蛋白是否為

5、唾液蛋白奠定了基礎(chǔ)。
　　(2)煙粉虱BtQ2477基因的序列分析及初步功能探究
　　BtQ2477基因編碼一個(gè)含有175個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分子量約為20.00 kDa，等電點(diǎn)為7.44。預(yù)測(cè)該基因編碼的蛋白無跨膜區(qū)，但是含有一個(gè)由23個(gè)氨基酸殘基編碼的信號(hào)肽，具有典型的分泌蛋白結(jié)構(gòu)。GenBank檢索結(jié)果表明，該基因編碼的蛋白隸屬于小蛋白超家族，可以幫助內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的蛋白進(jìn)行正確折疊。
　　通過浸潤(rùn)法在煙草上瞬

6、時(shí)表達(dá)BtQ2477基因，3天后統(tǒng)計(jì)煙粉虱存活率和產(chǎn)卵量均顯著高于對(duì)照，即在植物中過表達(dá)BtQ2477基因有利于煙粉虱的存活和產(chǎn)卵。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)BtQ2477基因?qū)煵軯A、SA相關(guān)防御基因的影響，結(jié)果表明，BtQ2477基因?qū)A和SA途徑的基因影響較小，可能參與調(diào)控其他防御途徑的相關(guān)基因。
　　綜上所述，煙粉虱疑似唾液效應(yīng)因子BtQ0F1基因和BtQ2477基因在煙粉虱-植物互作中發(fā)揮著重要作用。煙草中瞬時(shí)表達(dá)B