1、磺胺類(lèi)藥物具有廣泛的抗菌作用，經(jīng)常用于預(yù)防和治療畜禽細(xì)菌感染性疾病和原蟲(chóng)病等，但使用不合理很容易在動(dòng)物組織中造成殘留，對(duì)人們的健康造成潛在的危害，并嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的發(fā)展。許多國(guó)家和國(guó)際組織規(guī)定了磺胺類(lèi)藥物在動(dòng)物性組織中的最高殘留限量為0.1mg/kg。 國(guó)內(nèi)外已建立了很多理化方法檢測(cè)動(dòng)物性食品中殘留的磺胺藥。雖然有些方法比較靈敏精確，但由于花費(fèi)大、時(shí)間長(zhǎng)、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。ELISA方法是一種敏感性高、特

2、異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩選試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè)，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn)，作為一種快速、靈敏、特異的方法，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定正逐漸應(yīng)用于藥物的殘留檢測(cè)。本研究通過(guò)抗原的合成和抗體的制備，建立了SMD的ELISA測(cè)定方法，并檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)條件下雞體內(nèi)SMD的殘留變化。 為了制備針對(duì)SMD的單克隆抗體，用戊二醛法將SMD與牛血清白蛋白

3、(BSA)或卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)。用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行了掃描鑒定。該偶聯(lián)方法是通過(guò)SMD的N4端偶聯(lián)到載體蛋白上，在這種情況下，特異的N1端被免疫系統(tǒng)識(shí)別，從而產(chǎn)生針對(duì)SMD的高特異性抗體。 以制備的SMD-BSA人工抗原免疫BALB/c小鼠，取脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0-Ag14)融合。用間接ELISA和間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA篩選陽(yáng)性細(xì)胞，經(jīng)過(guò)3次亞克隆篩選出3株穩(wěn)定分泌針對(duì)SMD抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，擴(kuò)大培養(yǎng)，注入BABL

4、/c小鼠的腹腔，制備腹水，獲得高效價(jià)的抗體。建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的測(cè)定方法，檢測(cè)限為1.766ng/ml，定量限為11.274ng/ml。用SD、SMM、SQ等8種藥物作為競(jìng)爭(zhēng)抗原，做ELISA實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示抗體與這8種磺胺藥沒(méi)有交叉反應(yīng)。 動(dòng)物肌肉、肝臟和腎臟等樣品經(jīng)組織分散，通過(guò)乙腈-水溶液提取，離心后吸取部分上清液，再加水和乙酸乙酯提取，將有機(jī)層吹干后用堿性PBS溶解，加入正己烷后振蕩去脂肪。水相經(jīng)調(diào)節(jié)pH后作為待測(cè)溶