1、青春期是人體生長發(fā)育的第二個(gè)高峰期，也是骨量大量積累進(jìn)而影響骨峰值的最敏感時(shí)期。骨峰值是個(gè)體在遺傳背景許可的范圍內(nèi)獲得的最大骨量值，它是決定個(gè)體BMD的最主要因素，并可能影響其生命后期骨質(zhì)疏松的發(fā)病危險(xiǎn)。目前認(rèn)為，骨量增長受遺傳因素和鈣攝入量、體力活動(dòng)等多種環(huán)境因素的綜合影響。孿生子和家族研究表明，遺傳因素可以決定個(gè)體骨峰值的85％，而且遺傳因素對(duì)骨量的這種影響作用在兒童和青少年尤為明顯。因此確定青春期個(gè)體低骨量的遺傳學(xué)標(biāo)志對(duì)于其獲取最

2、大骨峰值進(jìn)而早期預(yù)防骨質(zhì)疏松具有重要意義。 研究目的：1.通過對(duì)OPG、COL1A2和TGF-β1基因多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布檢測(cè)，了解健康女童OPG、COL1A2和TGF-β1基因多態(tài)性分布頻率并探討其對(duì)骨密度的影響，為我國低骨量個(gè)體的篩查提供有價(jià)值的遺傳學(xué)標(biāo)志。 2.探討不同鈣攝入水平對(duì)青春前期女童骨量的影響。 3.探討兩種基因以及基因和鈣攝入水平對(duì)青春前期女童BMD的交互作用。 (擬選取下列7對(duì)研究因素

3、作交互作用分析：COL1A2*OPGT950C，COL1A2*OPGT245G，COL1A2*OPGA163G，COL1A2*Ca，OPGT950C*Ca，OPGT245G*Ca，OPGA163G*Ca) 研究方法：1.研究對(duì)象選擇在廣州市從化英豪學(xué)校、廣州市登峰小學(xué)、廣州市荔灣區(qū)華僑小學(xué)和南海南師附屬小學(xué)3～4年級(jí)的學(xué)生中按規(guī)定的納入標(biāo)準(zhǔn)選擇年齡在9～11.5歲未月經(jīng)初潮的女童。所有對(duì)象均由家長簽署知情同意書后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)研究。

4、 2.膳食調(diào)查采用3天膳食回顧法調(diào)查研究對(duì)象中三分之二走讀生3天的食物攝入種類和數(shù)量，對(duì)在校午餐者，進(jìn)行食物攝入種類和數(shù)量的核實(shí)。另三分之一全寄宿學(xué)生用稱重法稱量3日攝入食物種類和數(shù)量。所得的數(shù)據(jù)，用營養(yǎng)計(jì)算軟件V1.6計(jì)算膳食鈣、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)素的攝入量。 3.骨密度檢測(cè)采用雙能X線骨密度儀(DualenergyX-rayAbsorptiometry，DEXA)測(cè)定全身、L1-L4腰椎、左側(cè)近端股骨(包括股骨頸、大轉(zhuǎn)子和W

5、ard's三角區(qū))的BMD、BMC及體成分(LBM、FM、％FM)。 4.骨代謝相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)血清骨鈣素(OC)，放射免疫法；血清護(hù)骨素(OPG)，ELISA法；血清雌激素(E2)，ELISA法；尿脫氧吡啶啉(Dpd)，ELISA法，尿肌酐(Cr)，苦味酸法。 5.基因多態(tài)性檢測(cè)采用改良的上海生工試劑盒法提取血液基因組DNA；采用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)OPG基因T950C、T245G、A163G位點(diǎn)和COL1A2基因Ms

6、pⅠ位點(diǎn)及TGF-β1基因T861-20C位點(diǎn)多態(tài)性。 6.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MicrosoftExcel2003建立數(shù)據(jù)庫，使用SPSSforWindows11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義水平為0.05。 采用x2檢驗(yàn)對(duì)三種基因5個(gè)位點(diǎn)的基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)；各個(gè)基因型間的計(jì)量資料比較采用單因素方差分析(oneway-ANOVA)；三種鈣

7、攝入水平之間和各基因型之間骨密度的比較及交互作用檢驗(yàn)均采用協(xié)方差分析(ANCOVA)。 結(jié)果：1.對(duì)象一般情況本研究共有214名研究對(duì)象，均為漢族青春前期女童，平均年齡為10.07歲±0.72歲；平均身高為138.97cm±6.96cm；平均體重為31.54kg±5.73kg；膳食鈣平均攝入量為648.91mg/d±263.39mg/d，低于該年齡段的每日膳食參考攝入量(800mg/d)；膳食蛋白質(zhì)平均攝入量為67.12g/d±

8、18.25g/d；雌激素平均水平用Md±Q表示，為0.66ng/ml±1.06ng/ml；性成熟度Tanner分級(jí)在SMR1～SMR3之間。 2.5個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性分布規(guī)律在本次研究214名青春前期女童中，未發(fā)現(xiàn)TGF-β1基因T861-20C位點(diǎn)存在多態(tài)性。OPG基因3個(gè)位點(diǎn)基因型分布頻率分別為：T950C：TT-41.1％，TC-50.5％，CC-8.4％；T245G：TT-77.1％，TG-21.5％，GG-1.4％；A163

9、G：AA-74.8％，AG-21.5％，GG-3.7％；COL1A2基因型分布頻為：mm-73.4％，Mm-24.3％，MM-2.3％。經(jīng)?2檢驗(yàn)，4個(gè)位點(diǎn)基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。 3.鈣攝入量與青春期女童骨密度本研究按照鈣攝入量＜500mg/d、500-800mg/d和＞800mg/d分為Ca1、Ca2和Ca3三組，采用協(xié)方差分析校正年齡、身高、體重、雌激素和蛋白質(zhì)攝入量后比較三種鈣攝入水平對(duì)

10、骨密度的影響。結(jié)果顯示，TBBMC、TBBMD、FNBMD、WSBMD、LSBMD均隨鈣攝入量的增加而增加，三種鈣攝入水平間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。鈣攝入量＞800mg/d組女童的TBBMC、TBBMD及各部位BMD均顯著高于＜500mg/d組，各部位BMD也均顯著高于500-800mg/d組(P＜0.05)。骨代謝相關(guān)生化指標(biāo)中，骨形成指標(biāo)—血清OC隨鈣攝入量的增加而增加，骨吸收指標(biāo)—尿Dpd/cr隨鈣攝入量的增加而降低

11、。 4.四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)各基因型女童骨密度的比較采用協(xié)方差分析校正年齡、身高、體重、雌激素和鈣攝入量后比較各位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)骨密度的影響。結(jié)果顯示，僅有OPG基因T950C多態(tài)性位點(diǎn)三種基因型之間女童的TBBMC、TBBMD、FNBMD、WSBMD均存在顯著差異(P＜0.05)，并呈現(xiàn)出CC＞TC＞TT的趨勢(shì)。CC基因型者TBBMC、TBBMD、FNBMD和WSBMD顯著高于TT、TC基因型者(P＜0.05)，但TT和TC基因型比較，

12、TBBMC、TBBMD、FNBMD和WSBMD未見顯著差異(P＞0.05)。而三種基因型女童的LSBMD之間未發(fā)現(xiàn)顯著差異(P＞0.05)。OPG基因T245G、A163G多態(tài)性位點(diǎn)和COL1A2基因各基因型女童TBBMC、TBBMD、FNBMD、WSBMD和LSBMD均未發(fā)現(xiàn)有顯著差異(P＞0.05)。 5.兩種基因及基因與鈣攝入量對(duì)女童骨密度的交互作用經(jīng)雙因素協(xié)方差方法校正年齡、身高和體重后，所選取的7對(duì)因素(COL1A2*

13、OPGT950C，COL1A2*OPGT245G，COL1A2*OPGA163G，COL1A2*Ca，OPGT950C*Ca，OPGT245G*Ca，OPGA163G*Ca)中，僅發(fā)現(xiàn)OPG基因T950C位點(diǎn)與鈣攝入水平對(duì)WSBMD存在交互作用(P＜0.05)。 以基因型對(duì)女童進(jìn)行分組，分別比較不同鈣攝入水平對(duì)每組女童的WSBMD影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)于TT基因型女童，Ca1組的WSBMD較Ca2、Ca3組分別低13.0％、23.7％，

14、差異顯著(P＜0.05)。而TC、CC基因型女童的WSBMD在不同鈣攝入水平間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。再以鈣攝入水平對(duì)女童進(jìn)行分組，分別比較不同基因型對(duì)女童WSBMD的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，鈣攝入量＜500mg/d時(shí)，CC基因型女童的WSBMD較TT和TC基因型分別高19％、11.2％，差異有顯著意義(P＜0.01)。當(dāng)鈣攝入量增加到500mg/d以上時(shí)，三種基因型女童的WSBMD均未見顯著差異。表明OPG基因T950C多態(tài)性對(duì)WSBMD

15、的影響僅在低鈣攝入(＜500mg/d)時(shí)才具有顯著意義，表現(xiàn)為CC基因型女童的WSBMD顯著高于TT和TC基因型個(gè)體。 結(jié)論：1.健康青春前期女童OPG基因的三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布頻率為：T950C：TT-41.1％，TC-50.5％，CC-8.4％；T245G：TT-77.1％，TG-21.5％，GG-1.4％；A163G：AA-74.8％，AG-21.5％，GG-3.7％；COL1A2位點(diǎn)基因分布頻率為：mm-73.4％，

16、Mm-24.3％，MM-2.3％。 2.OPG基因T950C位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)女童TBBMD、FNBMD、WSBMD有顯著影響，CC基因型個(gè)體具有較高的骨密度，而TC+TT基因型個(gè)體的骨密度較低。該位點(diǎn)多態(tài)性可能是青春前期女童低骨量者篩選的一個(gè)有價(jià)值的遺傳學(xué)標(biāo)志。 3.在本研究涉及的鈣攝入量范圍內(nèi)，青春前期健康女童TBBMC、TBBMD、FNBMD、WSBMD、LSBMD均隨鈣攝入量增加而增加，鈣攝入量＞800mg/d的女童，