1、1、研究目的
　　 用環(huán)磷酰胺制備小鼠免疫低下與內(nèi)分泌紊亂模型，分別給小鼠灌服二至丸、地黃煎的水煎劑，結(jié)合其相關免疫指標和生殖內(nèi)分泌指標，經(jīng)統(tǒng)計分析，揭示與比較二至丸、地黃煎對小鼠免疫和生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用及調(diào)節(jié)機制。
　　 2、研究方法
　　 采用KM雌性小白鼠隨機分為6組：正常對照組、模型組、香菇多糖組、二至丸合地黃煎組、二至丸組和地黃煎組。除了正常對照組外，其余各組均給小鼠ip環(huán)磷酰胺建立免疫低下模型，

2、各組分別按設計劑量連續(xù)ig給藥1周。每日觀察并記錄小鼠生活狀態(tài)，給藥結(jié)束后處死小鼠分離臟器血清，進行以下指標的觀察與檢測：①檢測小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、卵巢指數(shù)及子宮指數(shù)；②通過HE染色觀察胸腺及卵巢的形態(tài)學改變；③通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清中IL-1a水平，用放射免疫法(RIA)檢測血清中雌二醇(E2)的水平；④通過免疫組化法測脾臟、胸腺中雌二醇受體(ER)表達，測卵巢、子宮白介素1受體(IL-1R)表達；⑤用流式細胞術

3、(FCM)檢測小鼠脾細胞的細胞周期及脾細胞的凋亡率。
　　 3、研究結(jié)果
　　 3.1、二至丸、地黃煎對小鼠一般生活狀態(tài)、免疫器官及生殖內(nèi)分泌器官的影響
　　 3.1.1、小鼠的一般生活狀態(tài)觀察與正常對照組小鼠比較，其余各組小鼠均于注射環(huán)磷酰胺后第1天開始出現(xiàn)精神萎靡、反應遲鈍、體毛稀少、體重下降等表現(xiàn)。但各治療組小鼠與模型組小鼠比較，狀態(tài)有所改善。
　　 3.1.2、免疫器官臟器指數(shù)及形態(tài)學觀察與正常對

4、照組比較，環(huán)磷酰胺可使小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)下降，而各用藥組均對此具有升高作用，其中，對于脾指數(shù)的升高作用明顯，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01～0.05)；二至丸單用對于胸腺指數(shù)的升高作用較好，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與正常對照組比較，環(huán)磷酰胺能使小鼠胸腺體積變得狹長細小，髓質(zhì)明顯萎縮，皮質(zhì)層相對較厚，生發(fā)中心明顯減少，而各用藥組對其均有不同程度的改善作用。
　　 3.1.3、生殖內(nèi)分泌器官臟器指數(shù)及形態(tài)學觀察與正常對照組

5、比較，環(huán)磷酰胺可使小鼠的卵巢指數(shù)和子宮指數(shù)下降，而各用藥組均對此具有升高作用，其中，對于子宮指數(shù)的升高作用明顯，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。二至丸、地黃煎單用或兩者合用對于子宮指數(shù)的升高效果一致，三者之間差異不具有統(tǒng)計學意義。香菇多糖組、二至丸合地黃煎組及地黃煎組對于卵巢指數(shù)的升高作用較好，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01～0.05)，其中香菇多糖組及地黃煎組效果尤為突出，二至丸單用對于卵巢指數(shù)的升高作用不明顯，不具有統(tǒng)計學意義。與正常

6、對照組比較，模型組小鼠卵泡形狀不規(guī)則，原始卵泡減少，生長卵泡增多，各用藥組對此均有不同程度的改善作用。
　　 3.2、二至丸、地黃煎對小鼠血清IL-1a、卵巢和子宮IL-1R水平表達的影響
　　 3.2.1、與正常對照組比較，環(huán)磷酰胺可使小鼠血清中IL-1a的含量下降，而各用藥組均對此具有升高作用，其中，二至丸合地黃煎組及二至丸組對于IL-1a的升高作用明顯，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.2.2、免

7、疫組化顯示IL-1R在卵巢中的水平明顯高于在子宮中的水平。正常對照組卵巢中IL-1R分布均勻，范圍廣泛；模型組卵巢中IL-1R分布較亂，范圍縮?。焊饔盟幗M卵巢中IL-1R分布較均勻，范圍較廣，與模型組比較，有所改善。正常對照組子宮中IL-IR分布較少，模型組可見少量分布，各用藥組可見少量分布，正常對照組、模型組及各用藥組之間無明顯差異。
　　 3.3、二至丸、地黃煎對小鼠血清E2、胸腺和脾臟ER水平表達的影響
　　 3.

8、3.1、與正常對照組比較，環(huán)磷酰胺可使小鼠血清中E2的含量下降，而各用藥組均對此具有升高作用，其中，二至丸合地黃煎組及陽性藥物香菇多糖組對于E2的升高作用明顯，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01～0.05)。
　　 3.3.2、免疫組化顯示胸腺與脾臟中ER的分布差異不大。正常對照組胸腺中ER分布均勻廣泛，染色呈強陽性；模型組胸腺中ER分布雜亂不均，染色呈弱陽性；用藥組中香菇多糖組、二至丸合地黃煎組、二至丸組胸腺中ER的分布較均勻，范圍

9、較廣，與模型組比較，有一定改善。正常對照組脾臟中ER分布均勻廣泛，染色呈強陽性；模型組脾臟中ER分布不均勻，且范圍較小，染色呈弱陽性；各用藥組脾臟中ER的分布較均勻，范圍較廣，與模型組比較，有一定的改善。
　　 3.4、二至丸、地黃煎對小鼠脾細胞周期及細胞凋亡的影響
　　 3.4.1、脾細胞的細胞周期環(huán)磷酰胺能明顯抑制脾細胞增殖，各用藥組均能拮抗環(huán)磷酰胺引起的脾細胞增殖抑制，表現(xiàn)為G0+G1期較環(huán)磷酰胺模型組減少，S期明

10、顯增加，G2+M期減少，其中二至丸組及地黃煎組G2+M期減少較明顯，具有統(tǒng)計學意義。二至丸、地黃煎單用與合用效果比較顯示，兩藥合用S期增加更明顯，G0+G1期減少更明顯，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 3.4.2、脾細胞的細胞凋亡率環(huán)磷酰胺能明顯誘導小鼠脾細胞凋亡，經(jīng)用藥后，除了香菇多糖組外，其余各用藥組均能明顯拮抗環(huán)磷酰胺引起的脾細胞凋亡，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。二至丸、地黃煎單用與合用效果比較，差異無統(tǒng)計學意義。

11、　　 4、結(jié)論
　　 ①二至丸、地黃煎單用或者兩者合用對于免疫低下小鼠的一般生活狀態(tài)、免疫器官的臟器指數(shù)（胸腺指數(shù)、脾指數(shù)）及生殖內(nèi)分泌器官的臟器指數(shù)（卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)）均有一定的改善作用，單用與合用的效果差異不大，與陽性藥物香菇多糖的效果基本一致。胸腺、卵巢HE染色的結(jié)果與上述臟器指數(shù)的結(jié)果基本一致。
　　 ②二至丸、地黃煎單用或者兩者合用對于免疫低下小鼠血清中免疫細胞因子IL-1a的水平均有一定的改善作用，合用比

12、單用及陽性藥物香菇多糖的效果好；對于生殖內(nèi)分泌器官（卵巢）中的白介素1受體(IL-1R)的含量均有不同程度的改善作用，單用與合用的效果差異不明顯。
　　 ③二至丸、地黃煎單用與合用對于免疫低下小鼠血清中雌激素E2的水平均有一定的改善作用，合用比單用的效果好，陽性藥物香菇多糖對于E2水平的改善作用更好；對于免疫器官（胸腺、脾臟）中的雌二醇受體(ER)含量均有不同程度的改善作用，單用與合用的效果差異不明顯。
　　 ④二至丸、

13、地黃煎單用與合用對于免疫低下小鼠脾細胞的細胞周期S期（DNA合成期）具有顯著的提高作用，合用比單用的效果好，均比陽性藥物香菇多糖的效果好。二至丸、地黃煎能明顯拮抗環(huán)磷酰胺引起的脾細胞凋亡，單用與合用的效果差異不明顯，均比陽性藥物香菇多糖的效果好。
　　 ⑤環(huán)磷酰胺作為傳統(tǒng)免疫低下造模藥，在打擊免疫器官的同時，對于生殖內(nèi)分泌器官的打擊同樣存在，也就是說它既能造成免疫低下，也能造成生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂。
　　 ⑥二至丸、地黃

14、煎對于實驗性免疫低下小鼠的免疫指標、生殖內(nèi)分泌指標均有一定的改善作用，在提高免疫功能的同時，對其生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能也有一定的增強作用；也就是說免疫功能的提高有助于生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)恢復平衡，而生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的平衡對于免疫功能的恢復也具有一定的作用。二至丸、地黃煎對于免疫生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)具有一定的網(wǎng)絡調(diào)節(jié)作用。
　　 ⑦單用二至丸對于胸腺指數(shù)的改善效果較好；單用地黃煎對于卵巢指數(shù)的改善效果較好；對于血清中IL-1a、E2水平及脾細胞周

15、期S期的改善方面，兩者合用的效果比單用的效果好。綜合考慮，對于免疫生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，二至丸、地黃煎兩者合用比單用更具優(yōu)勢。
　　 5、創(chuàng)新之處
　　 ①現(xiàn)國內(nèi)外有關二至丸的實驗研究主要集中在對免疫方面的研究，對生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)影響機制的研究較少，關于地黃煎的研究，至今還沒有發(fā)現(xiàn)，這也是本研究的創(chuàng)新之一
　　 ②本研究的創(chuàng)新之處還在于，將生殖內(nèi)分泌與免疫兩大系統(tǒng)相結(jié)合，證實二至丸、地黃煎在增強免疫功能的同時，也能