1、目的:觀察糖基化終產物(advanced glycation end products,AGEs)對大鼠血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)鈣化的影響及可能的機制,并探討二甲雙胍(Metformin,Met)對上述影響的干預作用。
　　 方法:1、體外培養(yǎng)VSMCs細胞株,在含10 mmol·L-1β-甘油磷酸鹽(β-GP)培養(yǎng)液(即鈣化培養(yǎng)液)中加入不同濃度(50、100、20

2、0、400 mg·L-1)的AGE-BSA共同孵育VSMCs不同時間(0,3,6,9d)。采用細胞層鈣沉積含量、Von kossa染色和細胞內堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性測定判斷細胞鈣化程度,RT-PCR、Western-blot檢測骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)mRNA及蛋白的表達。2、觀察不同濃度二甲雙胍(10-4mol·L-1、5x10-

3、5mol·L-1、10-5mol·L-1)對上述影響的干預作用。3、用200 mg·L-1 AGE-BSA干預鈣化培養(yǎng)液培養(yǎng)的VSMCs不同時間(12h,24h,48h,72h),在各時間點用western bloting及RT-PCR同時觀察細胞內質網應激相關指標GRP-78及caspase-12蛋白及mRNA的表達。
　　 結果:1、AGE-BSA呈時間和濃度依賴性增加VSMCs層鈣沉積含量和ALP活性,200 mg·L-1

4、 AGE-BSA與VSMCs共孵育10天,與對照組相比,細胞層鈣沉積含量(1.64±0.18 vs2.90±0.19,p<0.05)及ALP活性(174.44±7.62 vs262.54±17.95,p<0.05)明顯增加,Von kossa染色顯示細胞間大量棕褐色顆粒沉積；AGE-BSA促進VSMCsBMP-2 mRNA和蛋白表達,200 mg·L-1 AGE-BSA與VSMCs共孵育24 h,與對照組相比,BMP-2 mRNA(0.

5、301±0.032 vs0.598±0.049,p<0.01)及蛋白(0.307±0.015vs0.908±0.025,p<0.01)明顯增加。2、不同濃度二甲雙胍與AGE-BSA(200 mg·L-1)共同干預VSMCs10天后,與對照組相比,細胞層鈣沉積含量及ALP活性明顯降低(P<0.05)；二甲雙胍與AGE-BSA共同干預VSMCs24 h后,與對照組相比,BMP-2mRNA和蛋白的表達水平較對照組明顯降低(P<0.01)。3、

6、與對照組相比,200 mg·L-1AGE-BSA干預鈣化培養(yǎng)的VSMCs,內質網應激指標GRP-78、caspase-12的蛋白及mRNA表達均增加,GRP-78蛋白及mRNA表達在干預24h時達高峰,caspase-12 mRNA表達在48h時增強。
　　 結論:1、AGE-BSA可明顯增加VSMCs層鈣沉積含量和ALP活性,上調BMP-2mRNA及蛋白水平的表達,促進VSMCs鈣化。2、二甲雙胍能抑制AGE-BSA誘導的VS