1、目的:該實(shí)驗(yàn)采用大鼠CLP模型動(dòng)態(tài)觀察膿毒癥動(dòng)物主要臟器TNF-α mRNA和蛋白表達(dá)的特點(diǎn)及JAK/STAT信號(hào)通路對(duì)其表達(dá)的影響,初步探討G-菌膿毒癥時(shí)TNF-α誘生的信號(hào)調(diào)控機(jī)制;闡明JAK/STAT信號(hào)通路與TNF-α表達(dá)的相互關(guān)系及其在膿毒癥所致多器官功能損害發(fā)病過程中的作用,旨在為進(jìn)一步探索膿毒癥的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制和防治途徑提供新的思路.方法:雄性Wistar大鼠140只,隨機(jī)分為8組:(1)正常對(duì)照組(n=10),動(dòng)物于麻醉后

2、活殺;(2)假手術(shù)對(duì)照組(n=10),動(dòng)物于開關(guān)腹腔手術(shù)后2h活殺;(3)盲腸結(jié)扎穿孔組(n=60):按時(shí)間點(diǎn)分別于CLP后0.5、2、6、12、24和48h活殺動(dòng)物;(4)AG490(JAK2激酶抑制劑)組(n=24):CLP前20mins皮下注射AG490 8.0 mg/kg,然后于CLP后2、6、24和48h活殺;(5)RPM(rapamycin,STAT抑制劑)組(n=24):CLP前20mins皮下注射注射RPM 0.4 mg

3、/kg,并于CLP后2、6、24和48h活殺.(6)DMSO(二甲基亞砜,試劑的溶質(zhì))組(n=12):開關(guān)腹腔手術(shù)前20mins皮下注射DMSO 4.0 ml/kg,于開關(guān)腹腔術(shù)后2和24h活殺.經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,分離血標(biāo)本用于測(cè)定血清生化指標(biāo).無菌留取動(dòng)物肝、肺組織經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進(jìn)行TNF-αmRNA表達(dá)的檢測(cè).TNF-α蛋白水平經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè).血清ALT、AST、BUN、Cr等使用717

4、0自動(dòng)生化分析儀測(cè)定;肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性采用酶學(xué)分光光度法測(cè)定;小腸組織二胺氧化酶(DAO)活性采用分光光度法測(cè)定.結(jié)論:1.嚴(yán)重腹腔感染可明顯上調(diào)膿毒癥動(dòng)物機(jī)體肝、肺組織"早期"介質(zhì)--TNF-αmRNA和蛋白的表達(dá),局部組織TNF-α高表達(dá)與感染后多器官功能損害的發(fā)病過程有關(guān).2.阻斷JAK/STAT途徑可明顯下調(diào)組織TNF-α的表達(dá),以肝、肺尤為顯著.表明JAK/STAT信號(hào)通路參與了膿毒癥大鼠TNF-α表達(dá)的調(diào)控過