榮昌豬、長(zhǎng)白豬免疫相關(guān)基因FKBP5的克隆、表達(dá)以及其表達(dá)蛋白質(zhì)活性分析.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本實(shí)驗(yàn)用RACE、qPCR、Western Blot、基因克隆、測(cè)序、表達(dá)蛋白等方法,克隆了榮昌豬、長(zhǎng)白豬FKBP5基因cDNA全長(zhǎng)、構(gòu)建了FKBP5組織表達(dá)譜、表達(dá)純化了FKBP5蛋白,得到了如下結(jié)果:
  1、利用3',5'末端快速擴(kuò)增法(Rapid Amplification of cDNA Ends techniques,RACE)從榮昌豬和長(zhǎng)白豬胸腺組織中首次克隆出榮昌豬、長(zhǎng)白豬FKBP5基因。榮昌豬FKBP5基因cDN

2、A全長(zhǎng)為4119 bp,CDS區(qū)長(zhǎng)為1374 bp,編碼458個(gè)氨基酸的多肽,在5'端和3'端分別含有212 bp和2533bp的非編碼區(qū);長(zhǎng)白豬FKBP5基因cDNA全長(zhǎng)為4164bp,CDS區(qū)長(zhǎng)為1374bp,編碼458個(gè)氨基酸的多肽,在5'端和3'端分別含有255bp和2535bp的非編碼區(qū)。
  2、運(yùn)用qPCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)了該基因在榮昌豬和長(zhǎng)白豬不同組織中的mRNA和蛋白表達(dá)譜,并且分析了FKBP5

3、 mRNA在榮昌豬和長(zhǎng)白豬各組織中的表達(dá)差異。研究結(jié)果表明,在所檢測(cè)的組織中,心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、肌肉、性腺、胸腺中均有FKBP5基因表達(dá),其中,在先天免疫相關(guān)組織胸腺中表達(dá)豐度最高,且顯著性高于其它組織,并且FKBP5基因在長(zhǎng)自豬胸腺組織中的表達(dá)量顯著性高于榮昌豬胸腺組織表達(dá)量。
  3、分別將榮昌豬、長(zhǎng)白豬CDS區(qū)克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-28a,構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化Rosetta蛋白表達(dá)菌,分離純化出具有活性的榮昌豬

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