羊附紅細胞體PCR診斷方法的建立和豬附紅細胞體病的治療試驗.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、附紅細胞體病是由附紅細胞體(Eperythrozoon)寄生于多種動物的紅細胞表面、血漿及骨髓中引起的一種人畜共患病。關(guān)于附紅細胞體的分類地位目前仍有爭議,傳統(tǒng)的分類學(xué)方法將附紅細胞體列為立克次氏體,但是近年來根據(jù)16S-rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果表明,附紅細胞體更接近于支原體(Mycoplasma)。 直接鏡檢是目前臨床上診斷該病的主要手段,包括鮮血壓片和涂片染色,但該方法假陽性較多見。動物實驗也是確診的手段之一,但所費

2、時間太久。血清學(xué)診斷方法包括間接血凝試驗(IHA)、補體結(jié)合試驗(CFT)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等,但由于附紅細胞體抗體水平的變化沒有規(guī)律而常出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。鑒于上述原因,為了建立特異準確的診斷方法,本研究首先進行了羊附紅細胞體病的PCR診斷方法的研究。 為建立特異、敏感、快速的羊附紅細胞體診斷方法,利用原核生物16S rRNA基因通用引物擴增羊附紅細胞體16S rRNA基因序列,并進行序列比對和系統(tǒng)發(fā)育樹分析。根據(jù)

3、所測得的羊附紅細胞體16S rRNA基因序列,設(shè)計一對種特異性引物,建立了羊附紅細胞體的PCR診斷方法。特異性試驗和敏感性試驗表明,此診斷方法只能特異性地擴增羊附紅細胞體的16S rRNA基因序列的特異性片段,檢測羊附紅細胞體最低DNA量為4.5fg。利用該方法對湖北省羊附紅細胞體感染情況進行了流行病學(xué)調(diào)查,結(jié)果顯示陽性感染率為17.48%,說明羊附紅細胞體在湖北省的流行情況比較廣泛。 為了驗證新藥二丙酸咪唑苯脲對豬附紅細胞體病

4、的治療效果,本試驗以PCR檢測陽性的斷奶仔豬為對象,注射免疫抑制劑誘導(dǎo)發(fā)病后進行治療,試驗設(shè)二丙酸咪唑苯脲高中低劑量組,血蟲凈治療組,陽性對照組和陰性對照組,結(jié)果證明二丙酸咪唑苯脲在2.0mg/kg劑量時,對附紅細胞體有一定的抑制和殺滅作用,效果最好,優(yōu)于血蟲凈。本實驗的結(jié)果為臨床應(yīng)用二丙酸咪唑苯脲治療豬附紅細胞體病提供了重要依據(jù)。 近幾年來,國內(nèi)有關(guān)豬病的報道似乎以豬附紅細胞體病為多,凡遇到高燒、黃疸、皮膚發(fā)紅等情況往往都以附

5、紅細胞體病定論。在調(diào)查和防治工作中血液涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)了一種異?,F(xiàn)象,血液中存在一種新的疑似病原,有人暫命名為“豬血鞭毛蟲病”。該疑似病原體存在于病豬血液中,有多種形態(tài),其中典型的呈紡錘形、兩極長有鞭毛。病豬的臨床癥狀類似于豬附紅細胞體病。隨著病情的發(fā)展,常在發(fā)生區(qū)域流行蔓延,病豬對早期用過的一些治療藥物耐受或產(chǎn)生抗藥性,嚴重影響了一些農(nóng)村地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。為此,本試驗對該病的病原學(xué)、臨床表現(xiàn)等進行了研究,并探討了該病的治療方法,為揭示這一

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