含CpG基序重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其遺傳穩(wěn)定性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、以對雞外周血單核細(xì)胞(PBMC,peripheral blood mononuclear cells) 具有最佳刺激活性的CpG基序(CpG Motif)為基礎(chǔ),人工合成含有5拷貝此種基序的寡聚脫氧核苷酸(oligodexynucleotides,ODN)并在兩端設(shè)計2對酶切位點,通過2次定向克隆和3次平末端克隆,將其分步串聯(lián)連接入pcDNA3.0 載體中的多克隆位點中,獲得了一組含有不同拷貝數(shù)(5、10,20,40,60拷貝)CpG基

2、序、對雞PBMC具有免疫刺激活性的重組質(zhì)粒. 應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分離 AA 肉雞PBMC,以所構(gòu)建的、富含Cp6基序的三種重組質(zhì)粒pcDNAACpG-3,pcDNAACpG-4,pcDNAACpG-5為刺激原,LPS作為陽性對照,進(jìn)行體外淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗,用MTT比色法來測定淋巴細(xì)胞的增殖能力和代謝強度.通過比較含有不同拷貝數(shù)CpG基序重組質(zhì)粒、同一重組質(zhì)粒的不同濃度對雞PBMC的免疫刺激效果,篩選出對雞具有最佳免疫刺激活性的重

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