1、蘋(píng)果樹(shù)腐爛病(apple tree Valsa canker)是我國(guó)各主要蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生且危害嚴(yán)重的一種真菌病害，該病害由蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)）引起。本研究首先建立了蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系，并應(yīng)用該體系從量化的角度檢測(cè)了八棱海棠種子、八棱海棠幼苗和蘋(píng)果品種接穗攜帶蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的帶菌率和帶菌量。通過(guò)人工接種和檢測(cè)，明確了蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌在枝條韌皮部和木質(zhì)部的擴(kuò)展情況。

2、主要研究結(jié)果如下:
　　1.首次建立了蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系:20μL反應(yīng)體系中，引物VE-F和VE-R各0.5μL，模板DNA1.0μL，含熒光染料的Mix10.0μL，ddH2O8.0μL;反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性300s，95℃變性12s，58.0℃退火12s，72℃延伸14s，40個(gè)循環(huán);羅氏Light Cycler96儀器生成的溶解曲線程序是95℃10s，65℃60s(2.20℃/s),97℃1s(0.

3、20℃/s)。
　　2.蘋(píng)果砧木八棱海棠的種子普遍攜帶蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌。張家口懷來(lái)、江蘇沐陽(yáng)、云南麗江和河北保定4個(gè)地區(qū)生產(chǎn)的海棠種子帶菌率分別為:12.87％、44.55％、22.19％和49.01％，平均帶菌量分別為5.79×102copies/g、2.76×103copies/g、7.74×102copies/g和4.68×102copies/g。病菌集中于內(nèi)外種皮，子葉和胚芽未檢測(cè)到病菌。
　　3.海棠種子出芽后的快速

4、生長(zhǎng)過(guò)程中，其攜帶腐爛病菌的帶菌率和帶菌量均呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。種子、2葉苗、4葉苗和8葉苗的平均帶菌率分別為12.87％、43.33％、50.00％和60.12％，平均帶菌量為5.79×102copies/g、8.82×103copies/g、5.88×104copies/g和1.39×105copies/g。8葉期后，海棠苗中腐爛病菌含量穩(wěn)定在1.30×105copies/g左右。
　　4.發(fā)生腐爛病的果樹(shù)果實(shí)中的蘋(píng)果種子與健康果樹(shù)

5、上的蘋(píng)果種子相比，攜帶蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌情況存在顯著性差異。病樹(shù)果實(shí)種子的平均帶菌率為10.00％，平均帶菌量為2.0×102copies/粒，而健康蘋(píng)果樹(shù)的果實(shí)種子中未檢測(cè)到腐爛病菌。
　　5.河北蠡縣接穗圃的富士接穗韌皮部和木質(zhì)部中蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的平均帶菌率分別為68.88％和76.67％，平均帶菌量分別為3.14×104copies/g和6.28×104copies/g。
　　6.室溫（約18℃）條件下人工接種蘋(píng)果樹(shù)腐爛病

6、菌于40根3年生蘋(píng)果枝條，接種21d后，韌皮部病斑向枝條端部和基部擴(kuò)展的平均距離分別為6.31cm和4.53cm，而病菌的平均擴(kuò)展距離分別為13.0cm和14.3cm;木質(zhì)部褐變組織向枝條端部和基部擴(kuò)展的平均距離分別為11.33cm和12.33cm，病菌的平均擴(kuò)展距離分別為13.33cm和16.33cm。病菌在韌皮部和木質(zhì)部的擴(kuò)展距離顯著大于其病斑的擴(kuò)展距離;木質(zhì)部褐變組織的擴(kuò)展距離顯著大于韌皮部病斑的擴(kuò)展距離;病健交界處發(fā)病部位與未發(fā)