1、正常狀態(tài)下IκBα在細胞質(zhì)中與轉(zhuǎn)錄因子NF-κB結(jié)合。在上游信號的刺激下，泛素化的IκBα的降解使NF-κB得到釋放、進入細胞核促進基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵事件。然而，目前關(guān)于IκBα的去泛素化的調(diào)節(jié)機制尚無清楚認識。
　　 轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)患者預(yù)后較差，而且對放化療不敏感。因此探索ccRCC轉(zhuǎn)移過程涉及的分子遺傳背景和主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對于ccRCC早期發(fā)現(xiàn)

2、、轉(zhuǎn)移預(yù)測、開發(fā)新的藥物治療靶點至關(guān)重要。
　　 方法：建立USPs(Ubquitin-specific proteases，USPs)表達文庫。采用蛋白組學(xué)及報告基因分析的方法初步篩選出抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的候選去泛素化酶。通過免疫沉淀、免疫印記方法檢測內(nèi)源性或過表達候選去泛素化酶在體內(nèi)體外條件下與IκBα的物理結(jié)合及去泛素化IκBα的功能。建立持續(xù)沉默去泛素化酶的細胞株，檢測該細胞株中TNFα介導(dǎo)的NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途

3、徑的激活情況，以及從mRNA及蛋白水平檢測NF-κB下游基因IL6的轉(zhuǎn)錄和表達情況。
　　 通過本實驗室建立的轉(zhuǎn)移性、非轉(zhuǎn)移性ccRCC細胞株(RCC05TXJ，轉(zhuǎn)移性；RCC05ZYJ，非轉(zhuǎn)移性)，采用低代數(shù)細胞通過cDNA microarray橫向?qū)Ρ确治雠c轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異表達基因，通過生物信息學(xué)的方法分析差異表達基因富集的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，實時熒光定量PCR縱向?qū)Ρ葯z測兩株細胞中不同時間點與富集的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相關(guān)分子的動態(tài)表達

4、情況，并通過沉默USP11在非轉(zhuǎn)移性ccRCC細胞株的表達、觀察相關(guān)分子的表達改變。
　　 結(jié)果：USP11在體內(nèi)或體外均與IκBα結(jié)合在一起，它是與IκBα結(jié)合的去泛素化酶。過表達USP11可以強烈的抑制IκBα的泛素化程度和NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。體外重組蛋白USP11在體外條件下可以發(fā)揮去泛素化IκBα的作用。進一步，抑制USP11的表達，可以提高TNFα介導(dǎo)的NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活程度，同時提高TNFα介導(dǎo)的依賴于N

5、F-κB轉(zhuǎn)錄的IL6的基因表達。
　　 差異表達基因譜中CA9、VEGF、MMP2、LAMA4、TNF家族成員、IL成員等的上調(diào)表達反映了ccRCC自身及腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的相關(guān)特征。細胞色素P450家族成員上調(diào)表達，它在某種程度上反映了腎癌的發(fā)生發(fā)展始終與環(huán)境因素在體內(nèi)代謝過程密切有關(guān)。VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、缺氧誘導(dǎo)以及新血管形成的過程富集了表達譜芯片的差異表達基因(p＜0.05，Benjamini＜1)。RhoC在RCC05TXJ

6、細胞傳代后48小時較RCC05ZYJ細胞上調(diào)表達(p＜0.05)，反映了腎細胞癌轉(zhuǎn)移的分子遺傳背景。兩株細胞同時傳代培養(yǎng)72小時后，HIF1α表達均有不同程度的升高，但在兩株細胞之間不存在明顯差異；TNFα、IL6、VEGF、MMP2等基因在轉(zhuǎn)移性腎細胞癌RCC05TXJ較非轉(zhuǎn)移性腎細胞癌RCC05ZYJ明顯上調(diào)表達(p＜0.05)；沉默USP11在非轉(zhuǎn)移性腎細胞癌RCC05ZYJ中的表達后，TNFα、IL6、VEGF表達上調(diào)(p＜0.