1、目的:
　　分別制備出包含有重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(RecombinantHuman bone morphogenetic Protein，BMP-2)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)以及兩種因子混合的殼聚糖(chitosan，CTS)納米粒，并對(duì)納米粒的體外釋放效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步研究?jī)煞N蛋白因子在生物學(xué)功能上的相互影響及聯(lián)合應(yīng)用效果等體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

2、r>　　方法:
　　1.以三聚磷酸鈉（sodium tripolyphosphate，TPP）為交聯(lián)劑，采用離子交聯(lián)法，通過(guò)空白納米粒篩選成形范圍，分別制備出空白、包載rhBMP-2、rhVEGF、rhBMP-2-VEGF復(fù)合的殼聚糖納米粒，對(duì)上述因子蛋白濃度、CTS濃度、TPP濃度、CTS與TPP質(zhì)量比這幾個(gè)因素進(jìn)行正交工藝驗(yàn)證，然后通過(guò)透視電鏡觀察納米粒形態(tài)及分布，粒徑分析儀測(cè)定納米粒粒徑及Zate電位。
　　2.利用酶

3、聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA)測(cè)定載藥殼聚糖納米粒的包封率并描述其緩釋藥動(dòng)學(xué)，計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累積釋放率，繪制釋放曲線。
　　結(jié)果:
　　1.離子交聯(lián)法制備殼聚糖納米粒操作簡(jiǎn)單、工藝穩(wěn)定，制得的納米粒規(guī)則呈球形、分散性好、粒徑集中。
　　2.rhVEGF殼聚糖納米粒制備最優(yōu)化工藝條件為:rhVEGF濃度為10ng/ml，CTS濃度為2mg/ml，TPP濃度

4、為1.5mg/ml，CTS/TPP為5∶1，此時(shí)所得rhVEGF殼聚糖納米粒粒徑為346.2±2.4nm，PDI為0.219±0.017，Zeta電位為24.0±0.9，包封率達(dá)98.43±1.10％。
　　3.rhBMP-2殼聚糖納米粒制備最優(yōu)化的工藝條件為:rhBMP-2濃度為50ng/ml，CTS濃度為3mg/ml，TPP濃度為1mg/ml，CTS/TPP為5∶1，此時(shí)所得rhBMP-2殼聚糖納米粒粒徑為333.0±2.3n

5、m，PDI為0.463±0.013，Zeta電位為30.0±0.8，包封率達(dá)92.63±1.33％。
　　4.rhBMP-2-rhVEGF殼聚糖納米粒制備最優(yōu)化的工藝條件為:rhBMP-2濃度為50ng/ml，rhVEGF濃度為10ng/ml，CTS濃度為1mg/ml，TPP濃度為1.5mg/ml，CTS/TPP為5∶1，此時(shí)所得rhBMP-2-rhVEGF殼聚糖納米粒粒徑為396.0±1.8nm，PDI為0.403±0.005，

6、Zeta電位為29.8±1.8，rhVEGF包封率為86.6±0.8％，rhBMP-2包封率為93.72±1.30％。
　　5.三種載蛋白的殼聚糖納米粒體外緩釋曲線相近，釋放最初24小時(shí)，釋藥量為1％～2％，后面快速上升，到第20天時(shí)，曲線趨于平緩，30天時(shí)，釋藥量達(dá)90％。
　　結(jié)論:
　　1.采用離子交聯(lián)法制備殼聚糖納米粒時(shí)，蛋白濃度、CTS濃度、TPP濃度、CTS與TPP質(zhì)量比對(duì)納米粒的粒徑、Zeta電位、包封率