1、流感病毒是引起流行性感冒的病原體，具有高度傳染性，極易發(fā)生流行，甚至達到世界范圍的大流行，每次大流行都造成了巨大的人力資源和物力資源的損失。目前H5N1人用禽流感疫苗主要是以雞胚為培養(yǎng)基質研發(fā)生產，然而當H5N1禽流感暴發(fā)時，難于在短期內提供足夠的雞胚來生產疫苗。此外，雞胚中可能帶有的外源性因子也影響疫苗的質量。非洲綠猴腎細胞Vero是WHO推薦的疫苗生產細胞，可采用微載體發(fā)酵罐進行大規(guī)模培養(yǎng)。獲得流感病毒Vero細胞高產適應株對于流感

2、疫苗的生產具有重要意義。
　　 本實驗以傳統(tǒng)遺傳重配技術獲得H5N1流感病毒Vero細胞適應株，制備Vero細胞H5N1流感疫苗。以流感病毒Vero細胞適應株A/Yunnan/1/2005（H3N2）va為母株與反向遺傳學技術改造的禽流感病毒疫苗株A/Anhui/1/2005（H5N1）共同感染SPF雞胚或Vero細胞，用抗A/Yunnan/1/2005（H3N2）va羊抗體篩選，血凝抑制試驗和基因測序鑒定病毒型別。結果表明：通

3、過流感病毒Vero細胞適應株與流行株的重配和抗體篩選，獲得了1株高產的H5N1流感病毒Vero細胞適應株。同時進行了重配毒株的一些生物學試驗：病毒感染性滴度為1×107.2PFU/ml、流感特異性免疫熒光陽性、電子顯微鏡下可觀察到完整的病毒顆粒、與H5N1標準抗血清瓊脂糖板上形成明顯的沉淀圈；且該毒株對雞胚和小鼠不具有致毒性。
　　 對該重配病毒株進行微載體培養(yǎng)，優(yōu)化培養(yǎng)條件。其中，以DMEM/F12為基礎培養(yǎng)基，進行的有血清微