1、【研究背景】：：
　　病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。它們的共同特點(diǎn)是以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）代謝紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)大量異常沉積，造成患者外觀畸形和功能障礙。研究表明，TGF-β是導(dǎo)致瘢痕形成的重要細(xì)胞因子，它主要通過TGF-β/Smad信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的增殖，凋亡，轉(zhuǎn)分化和膠原代謝。IFN-γ是細(xì)胞因子類藥物，具有抗病毒，抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的功能。除此之外，研究表明它還可以用于治療纖維化疾病如肝纖維化，肺纖

2、維化，病理性瘢痕和系統(tǒng)性硬化。但是，IFN-γ抗纖維化的具體機(jī)制如何，尤其是它對(duì)病理性瘢痕成纖維細(xì)胞TGF-β/Smad信號(hào)通路的作用和機(jī)制如何，尚未見明確報(bào)道。
　　【研究目的】
　　1.觀察在病理性瘢痕成纖維細(xì)胞中，IFN-γ對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA，MMP1，TIMP1，CTGF作用，闡明IFN-γ抗纖維化的機(jī)制。
　　2.明確IFN-γ不同作用時(shí)間和濃度時(shí)對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞中Smad3，Smad7表達(dá)水平的

3、影響，初步探討其作用機(jī)制。
　　【研究內(nèi)容】：
　　1.IFN-γ對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞中CTGF表達(dá)的影響：分別采用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡的方法檢測CTGF的基因和蛋白水平。
　　2.IFN-γ對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)后α-SMA，MMP1，TIMP1表達(dá)的影響：采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測MMP1和TIMP1的表達(dá)。
　　3.IFN-γ不同作用時(shí)間和作用濃度

4、對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞中Smad3和Smad7表達(dá)的影響：分別采用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Smad3和Smad7的基因和蛋白水平。
　　4.構(gòu)建YB-1的過表達(dá)載體和shRNA載體。
　　【研究結(jié)果】：：
　　1.IFN-γ可以下調(diào)基礎(chǔ)狀態(tài)下CTGF的表達(dá)量，還可以顯著拮抗由TGF-β1刺激引起的CTGF表達(dá)的上調(diào)。
　　2.IFN-γ可以降低瘢痕成纖維細(xì)胞中α-SMA的表達(dá)量，還可以抑制由TGF-β1引起的

5、α-SMA表達(dá)量的上調(diào)；IFN-γ單獨(dú)作用對(duì)MMP1和TIMP1均無明顯作用，但與TGF-β1聯(lián)合作用時(shí)，可以拮抗TGF-β1對(duì)MMP1和TIMP1表達(dá)的影響。
　　3.IFN-γ作用后可以降低Smad3的表達(dá)量，同時(shí)升高Smad7的表達(dá)量，這種作用是通過抑制或刺激基因轉(zhuǎn)錄來實(shí)現(xiàn)的，而且呈時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)。
　　4.成功構(gòu)建YB-1的過表達(dá)載體和shRNA載體。
　　【研究結(jié)論】
　　1.IFN-γ可以拮抗由T