農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將轉(zhuǎn)錄因子ABP9轉(zhuǎn)化大豆及遺傳轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、大豆是重要的油料作物和飼料作物,也是人類的主要食用蛋白和工業(yè)原料的來源。近些年隨著我國水土資源的嚴(yán)重流失,土地荒漠化不斷擴(kuò)大,大豆的生產(chǎn)受干旱、鹽害等不利因素的影響,產(chǎn)量很不穩(wěn)定,產(chǎn)品已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能自給。因此,通過基因工程手段提高大豆抗逆性,在理論和生產(chǎn)上具有重要意義。 已有研究從玉米中鑒定了過氧化氫酶CATI基因啟動子應(yīng)答ABA信號的順式元件ABRE,克隆了與之特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子ABP9基因;將ABP9克隆到質(zhì)粒中構(gòu)建了植物組成

2、型表達(dá)載體pCRl20-35S-ABP9,并證明了ABP9的表達(dá)可以提高植物對干旱、鹽害等產(chǎn)生的氧化逆境的抗性。 本研究利用含有表達(dá)載體pCR120-35S-ABP9的農(nóng)桿菌EHA105,以大豆子葉節(jié)為外植體,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化大豆,以期獲得抗逆性提高的轉(zhuǎn)基因大豆;同時對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)條件進(jìn)行優(yōu)化,為提高大豆遺傳轉(zhuǎn)化效率提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn),合豐25、黑農(nóng)35、爭光1號等品種再生能力較強(qiáng);升汞滅菌法對種子的傷害大于氯

3、氣薰蒸滅菌法;培養(yǎng)基中加入L-半胱氨酸可提高抗性叢生芽獲得率,并在各培養(yǎng)階段沒有共同促進(jìn)和累積抑制作用;外植體對光照和氧氣條件很敏感,并且對氧氣的敏感程度要大于光照;植物激素對叢生芽伸長影響的重要性依次為ZT、GA<,3>、IAA和6-BA,最優(yōu)濃度配比為:6-BA 1.5mg/L,GA<,3>0.75mg/L,IAA 0.1mg/L,ZT 1.0mg/L;利用優(yōu)化后的轉(zhuǎn)化條件,共獲得8株轉(zhuǎn)基因再生植株,經(jīng)PCR檢測和序列分析,4株為陽

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