激光微孔豬脫細胞真皮基質的生物相容性檢測及其移植實驗.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:由于同種異體皮來源有限,國內外學者一直尋求用異種來源的脫細胞真皮基質(acellular dermal matrix,ADM)作為真皮支架來治療深度皮膚損傷。豬來源的ADM由于來源廣、價格相對較低[1]、且在制備成ADM后能夠保持完整的三維立體結構而成為當前研究的熱點[2],但其血管化速度慢,限制了其在臨床上的廣泛推廣[3]。
   目的:檢測激光微孔豬脫細胞真皮基質(Laser micropore porcine ace

2、llulardermal matrix,LPADM)的生物相容性及其移植后的血管化速度,探討LPADM在臨床上廣泛應用的可能。
   方法:(1)切取成年雄性SD大鼠的背部全層皮膚,酶消化法分離出其中的成纖維細胞并培養(yǎng)至第三代,將其得到的成纖維細胞隨機分為A、B、C三組,其中A組為與LPADM共培養(yǎng)組;B組為與無孔ADM共培養(yǎng)組;C組為單純培養(yǎng)組,觀察各組成纖維細胞生長、增殖的情況,并利用雙夾心抗體ELISA法檢測接種后第1、3

3、、5天各組成纖維細胞活性細胞因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN的分泌。(2)取成年健康雄性SD大鼠18只,在其背部正中脊柱二側相對位置各做一2cm×2cm的“U”形皮瓣,并將皮瓣掀起,分別移植包埋LPADM及無孔ADM,于術后1、3、10天切取標本行組織學及電鏡檢查。(3)健康無皮膚疾病雄性裸鼠36只,隨機分為實驗組和對照組,“二步法”完成手術過程,其中實驗組移植LPADM和自體薄皮,對照組移植無孔ADM和自體薄皮,

4、于術后1、3、14天各組分別取6只裸鼠處死,切取標本行HE組織學檢查及電鏡檢查。
   結果:(1)共培養(yǎng)條件下,LPADM和無孔ADM均不會產(chǎn)生細胞毒性物質影響成纖維細胞的生長、增殖及活性細胞因子的分泌,實驗檢測到A、B、C三組的成纖維細胞均能夠在15min內快速貼壁,接種后各組成纖維細胞的細胞活性因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN無明顯差別,差異無顯著性(P>0.05)。(2)皮下包埋術后1天,LPADM

5、的膠原中即可見類血管內皮細胞,術后3天,微孔結構中即可見新生組織長入,移植物能夠與周圍自體組織緊密結合,術后第10天,LPADM可見明顯的血管化。而移植的無孔ADM在整個實驗觀察中未見新生血管形成,且炎癥反應較重。(3)實驗組術后1、3天的組織學切片:及掃描電鏡顯示,含豐富血管的基底新生組織可以通過微孔結構長入LPADM的內部,從而完成LPADM的快速血管化。實驗組術后3、14天組織學切邊顯示:微孔結構的存在還可以為成纖維細胞向LPAD

6、M中的遷移提供一條快速通道,為LPADM膠原網(wǎng)架功能的重建提供基礎。實驗組術后14天掃描電鏡顯示:LPADM中遷入的成纖維細胞細胞質中粗面內質網(wǎng)較多,膠原分泌旺盛,正積極參與真皮的修復。對照組的ADM中未見明顯的成纖維細胞遷入,且炎癥反應較重,無法與機體快速緊密的結合在一起。
   結論:設計的這種LPADM生物相容性高;不會產(chǎn)生對細胞有毒性的物質,移植后免疫源性低。且微孔結構能夠為LPADM的血管化提供通道,大大加快LPADM

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