1、 目的：通過(guò)在SD大鼠腦內(nèi)立體定向注射去除或外加血紅素結(jié)合蛋白(Hx)后的自體全血制作腦出血(ICH)模型,觀察Hx與血腫周圍腦組織含水量、血腫中血紅素(He)及其代謝產(chǎn)物含量變化、血腫周圍腦組織的炎癥反應(yīng)和自由基形成的關(guān)系,探討Hx在ICH后腦水腫形成中的作用及機(jī)制。方法 1.分組：100只SD大鼠隨機(jī)分為4組,即假手術(shù)組、ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組,每組25只,分5個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn),分別為手術(shù)后1d、3d、7d、14d、21

2、d,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均為5只大鼠。2.制作模型：(1)ICH對(duì)照組：采用立體定向注射技術(shù),向大鼠右側(cè)尾狀核注入自體全血50μl；(2)假手術(shù)組：只進(jìn)行手術(shù)過(guò)程,不注入自體全血；(3)Hx去除組：斷尾取血 1ml,采用親和層析法去除Hx,向大鼠右側(cè)尾狀核注入去除Hx后的自體全血50μl；(4)Hx干預(yù)組：斷尾取血50μl,向大鼠右側(cè)尾狀核注入外加1μl (5μg/μl)Hx后的自體全血50μl。3.術(shù)后2h按照Bederson評(píng)定方法進(jìn)行模型成

3、功評(píng)價(jià)；采用Garcia方法對(duì)各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分；采用干濕法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量；采用分光光度法檢測(cè)血腫中He、CO、鐵離子、非結(jié)合膽紅素(UCB)含量變化；采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物岐化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛(MDA)含量；采用放射免疫法測(cè)定炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量；光鏡觀察各時(shí)間點(diǎn)ICH后血腫周圍腦組織HE染色和免疫組織化學(xué)染色變化；采用雙評(píng)半定量法進(jìn)行神經(jīng)功能障

4、礙評(píng)分；數(shù) 據(jù)結(jié)果采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：1.神經(jīng)功能障礙評(píng)分：假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能障礙評(píng)分未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)；ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組在1d~21d各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分低顯著低于假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組在術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分顯著低于ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組在術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能障礙評(píng)分顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)。2.血腫周圍腦

5、組織含水量：假手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)；ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組術(shù)后3d~21d腦組織含水量顯著高于各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組在術(shù)后3d~21d組織含水量顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組在術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量顯著低于ICH對(duì)照組(P<0.05)。3.血腫周圍腦組織IL-1β、IL-6、TNF-α含量變化：假手術(shù)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)IL-1

6、β、IL-6、TNF-α含量未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)；ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組術(shù)后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組術(shù)后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組術(shù)后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著低于ICH對(duì)照組(P<0.05)。4.腦組織SOD活力、MDA含量變化：4.1 SOD

7、活力變化：假手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)；ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組SOD活力在術(shù)后1d~21d顯著低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組在術(shù)后1d~21d各時(shí)間點(diǎn)腦組織SOD活力顯著低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組在1d~21d腦組織SOD活力顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)。4.2 MDA含量變化：假手術(shù)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)腦組織MDA含量未見(jiàn)顯著性差異(P>0.0

8、5)；ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組在術(shù)后1d~21d腦組織MDA含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組在術(shù)后1d~21d各時(shí)間點(diǎn)腦組織MDA含量顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組在術(shù)后1d~21d各時(shí)間點(diǎn)腦組織MDA含量顯著低于ICH對(duì)照組(P<0.05)。5.血腫內(nèi)He及代謝產(chǎn)物(CO、Fe、UCB)含量：假手術(shù)組術(shù)后1d~21d 各時(shí)間點(diǎn)He及代謝產(chǎn)物含量未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)；ICH對(duì)照組、

9、Hx去除組和Hx干預(yù)組術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)He及代謝產(chǎn)物含量顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)He及代謝產(chǎn)物含量顯著高于ICH對(duì)照組(P<0.05)；Hx干預(yù)組術(shù)后3d~21d各時(shí)間點(diǎn)血腫內(nèi)He及代謝產(chǎn)物含量顯著低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的ICH對(duì)照組(P<0.05)。6.HE染色、免疫組織化學(xué)光鏡觀察結(jié)果：假手術(shù)組術(shù)后腦組織切片HE染色未見(jiàn)明顯病理改變；ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組術(shù)后可見(jiàn)腦組織疏松,

10、神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,血腫周圍腦組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、膠質(zhì)細(xì)胞增生,還可見(jiàn)少量血管擴(kuò)張等病理改變；Hx去除組腦組織切片所見(jiàn)上述病理改變程度較ICH對(duì)照組重,Hx干預(yù)組腦組織切片所見(jiàn)上述病理改變程度較ICH對(duì)照組輕。免疫組化顯示假手術(shù)組、ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均可以看到陽(yáng)性細(xì)胞,ICH對(duì)照組、Hx去除組、Hx干預(yù)組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯較假手術(shù)組多。7.免疫組織化學(xué)評(píng)分：假手術(shù)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)評(píng)分未見(jiàn)顯著性差異

11、(P>0.05)；ICH對(duì)照組、Hx去除 組、Hx干預(yù)組術(shù)后3d~21d免疫組織化學(xué)評(píng)分顯著高于各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組(P<0.05)；Hx去除組術(shù)后3d~21d評(píng)分顯著高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的ICH對(duì)照組；Hx干預(yù)組術(shù)后3d~21d免疫組織化學(xué)評(píng)分顯著低于該時(shí)間點(diǎn)的ICH對(duì)照組(P<0.05)。8.相關(guān)性分析：(1)ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)He及代謝產(chǎn)物含量和IL-1β、IL-6、TNF-α含量及MDA含量與免疫組織化學(xué)評(píng)

12、分呈負(fù)相關(guān),SOD活力與免疫組織化學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)；(2)ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組神經(jīng)功能障礙評(píng)分與He及代謝產(chǎn)物含量和腦組織含水量及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量呈負(fù)相關(guān),與SOD活力、免疫組織化學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)；(3)ICH對(duì)照組、Hx去除組和Hx干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量與He及代謝產(chǎn)物含量和IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量呈正相關(guān),與SOD活力、免疫組織化學(xué)評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論：1.自體全血制作