1、蛇皮果（Salaccazalacca(Gaertner) Voss ex. Vilm.）為棕櫚科（Palmae）蛇皮果屬（Salacca）果樹，原產于馬來半島至爪哇一帶，引進我國已有20多年歷史。有性繁殖是蛇皮果繁殖的重要方式，然而有性繁殖的蛇皮果苗木難以從形態(tài)上區(qū)分其性別，用實生苗造林時無法對雌雄比例進行合理配置。有鑒于此，本文通過RAPD分子標記技術找出了與蛇皮果性別相關的雄性特異性片段并轉化為SCAR標記，從而實現了蛇皮果的早期性

2、別鑒定。研究結果不僅可用于鑒別蛇皮果實生苗的性別，還可與種胚組培技術相結合形成蛇皮果雌苗快繁技術體系，為實現按需提供雌雄苗木提供技術支撐，改變現有雌雄混雜造林帶來的局限。因此，本研究對于提高我國蛇皮果栽培水平具有重要意義。
　　1、以蛇皮果新鮮葉片為材料，測試CTAB法、SDS法、CTAB-free法和改良CTAB法等4種蛇皮果基因組DNA提取方法，結果表明：改良CTAB法能有效地去除酚類物質、多糖和蛋白質的干擾，是蛇皮果基因組D

3、NA的有效提取方法。
　　2、以上述提取方法提取的蛇皮果基因組DNA為材料，通過調節(jié)Mg2+濃度、dNTPs濃度、Taq DNA聚合酶濃度以及退火溫度觀測反應產物的電泳效果，結果表明：PCR擴增體系為15μL：10×buffer1.5μL，0.12mmol/L dNTPs，0.12U/μLTaqDNA聚合酶，1.4mmol/L Mg2+，1.0μmol/L RAPD引物，12ng DNA模板。PCR擴增程序為：94℃預變性2min

4、；再40個循環(huán)：94℃變性30s，39℃退火30s和72℃延伸2min；最后72℃延伸10min。
　　3、利用上述1和2確定的方法，以蛇皮果‘Pondoh’品種雌雄株各10株為材料，篩選了900條隨機引物，結果表明：只有引物S1431（序列：5’-CCTGGGTCAG-3’）產生了一條大小約為1600bp的雄性特異片段。利用S1431引物對同一蛇皮果林另外隨機抽取的蛇皮果雌雄株各10株進行檢測，所得結果相同，說明RAPD分子標記

5、具有鑒別蛇皮果性別的可行性。
　　4、對蛇皮果RAPD分子標記獲得的雄性特異片段進行克隆和測序，結果表明：該特異性片段為一條1640bp堿基的序列，具體序列省略。
　　5、根據測序所得的序列結果進行分析，設計出一對大小為18bp的SCAR標記引物 LF（5’-AGCACAGCCTAGTTAGTT-3’）和引物 LR（5’-TGACACCTCCTCCCATAT-3’），利用該對引物對12株營養(yǎng)生長期蛇皮果成年植株進行PCR反應

6、，結合繁殖生長期觀察，結果表明：有雄性特異片段的為雄株，沒有雄性特異片段的為雌株。同時利用該對引物對20株蛇皮果實生苗進行PCR反應，結果表明：其中有8個樣本得到與雄株相同大小的特異片段，另外12個樣本沒有任何片段。利用該對引物對7株‘Gading Auy’品種、4株‘Pondoh’品種和1株‘Bali’品種共12株蛇皮果種胚組培苗進行了PCR擴增，結果沒有得到任何特異性片段。
　　6、以種子數不同的果實育出的苗為材料，利用上述L

7、F和LR引物進行分析，根據雄性特異片段的有無確定實生苗的雌雄，結果表明：一個果內具有2個種子和3個種子繁育出的群體雌雄比例為1:1；一個果內具有1個種子的雄性概率為80％；蛇皮果實生苗的總體雌雄比例為1:1。
　　7、對含雄性特異片段的蛇皮果和不含雄性特異片段的蛇皮果的種子重量、苗木葉總長度和根總長度進行比較，結果表明：兩組各性狀之間不存在顯著差異，表明難于通過這些性狀鑒別實生苗性別。
　　8、對蛇皮果雌雄株早期性別鑒定基因