1、本文主要從以下幾個(gè)部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 血清Galectin-3在肝衰竭患者中的水平和意義
　　目的:檢測(cè)肝衰竭(HF)患者血清Galectin-3的表達(dá)，探討血清Galectin-3水平是否與肝臟疾病損傷的嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān)，以及Galectin-3對(duì)HF患者預(yù)后的預(yù)測(cè)作用。同時(shí)，探討Galectin-3和其他HF預(yù)后指標(biāo)聯(lián)合對(duì)HF預(yù)后判斷的作用。
　　方法:收集于2014年1月至2014年12月在南京市第二

2、醫(yī)院肝病科住院的HF患者（肝衰竭組，n=76），高黃疸患者（高黃疸組，n=38）和慢性乙型肝炎輕中度患者（慢乙肝組，n=26），正常對(duì)照（正常組，n=25）來自于同時(shí)間段的本院健康體檢者。入院時(shí)檢測(cè)各組的血清Galectin-3水平，并比較各組Galectin-3的血清水平。將肝衰竭組按照隨訪結(jié)束時(shí)患者的預(yù)后情況分為生存組和死亡組，觀察肝衰竭生存組和死亡組患者治療前與治療后血清Galectin-3水平的變化。同時(shí)，將兩組患者的一般基礎(chǔ)資

3、料、生化指標(biāo)、HF并發(fā)癥和血清Galectin-3水平進(jìn)行t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)，篩選出有意義的變量進(jìn)一步行多因素Logistic回歸分析。最后，將多因素Logistic回歸分析得出的有意義的變量建立HF預(yù)后模型，并確定該模型的最佳臨界值。
　　結(jié)果: ELISA法檢測(cè)血清Galectin-3結(jié)果顯示，肝衰竭組為11.093±5.245 ng/ml，高黃疸組為11.004±6.634 ng/ml，慢乙肝組為3.6

4、26±0.806 ng/ml，正常組為3.582±0.729 ng/ml。肝衰竭組明顯高于正常組和慢乙肝組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肝衰竭組與高黃疸組無明顯差異(P＞0.05)。
　　肝衰竭生存組和死亡組患者TBIL（P=0.028）、ALB（P=0.018）、INR(P=0.011)、Na+(P=0.001)、Bun(P=0.032)、Cr(P=0.026)、AFP(P=0.027)、TG（P=0.033）、TSH(P

5、=0.001)、肝性腦病(P=0.008)、感染(P=0.001)、腹水（P=0.000）和血清Galectin-3(P=0.01)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)多因素Logistic回歸分析得出血清TBIL(P=0.011，β=-2.084)、INR(P=0.036,β=-3.520)、TSH(P=0.011,β=1.633)、血清Galectin-3(P=0.011,β=0.43)和腹水(P=0.001，β=-7.223)與HF的預(yù)后有關(guān)

6、。建立了HF預(yù)后擬合回歸模型: P=1/(1+e-y)，y=0.386-2.084X1-3.52X3+1.633X9+3.323X10-7.223X13（其中P為HF患者的生存概率，X1、X3、X9、X10、X13分別代表血清TBIL、INR、TSH、血清Galectin-3和腹水），回歸模型ROC曲線下面積為0.724，模型對(duì)檢驗(yàn)樣本的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率為85％。
　　對(duì)肝衰竭組患者的血清Galectin-3水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察后發(fā)現(xiàn)，肝衰

7、竭生存組患者的血清Galectin-3治療后水平較治療前明顯升高(Z=-6.792，P=0.000)，而肝衰竭死亡組患者治療前后血清Galectin-3水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.665，P=0.506）。
　　結(jié)論:血清Galectin-3是HF患者預(yù)后的一種保護(hù)因素，可以作為HF預(yù)后的判斷指標(biāo)之一，可聯(lián)合臨床其他指標(biāo)對(duì)HF預(yù)后做出合理的判斷。
　　第二部分 Galectin-3對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制

8、r>　　目的:構(gòu)建Galectin-3基因特異性干擾慢病毒載體和過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染正常人肝細(xì)胞株(human hepatocyte，HH)。觀察干擾慢病毒載體和過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HH后，Galectin-3蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)觀察HH的增殖活性和Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　方法:實(shí)驗(yàn)共分為五組，以Galectin-3 shRNA干擾慢病毒轉(zhuǎn)染的HH為干擾組，同時(shí)設(shè)置干擾陰性對(duì)照組，以Galectin-3過

9、表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染的HH為過表達(dá)組，同時(shí)設(shè)置過表達(dá)陰性對(duì)照組，以未作處理的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HH為空白組。慢病毒載體轉(zhuǎn)染HH后置于熒光倒置顯微鏡下觀察感染效率，Western-blotting檢測(cè)各組Galectin-3蛋白的水平。應(yīng)用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，Western-blotting檢測(cè)軸蛋白(Axin)、總的β連環(huán)蛋白(β-catenin)、磷酸化的β連環(huán)蛋白(p-β-catenin)、總的糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷

10、酸化的糖原合成酶激酶-3(p-GSK-3β)等蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:干擾慢病毒載體和過表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染HH后，Western-blotting結(jié)果顯示，干擾組Galectin-3蛋白的表達(dá)水平較空白組和干擾陰性對(duì)照組明顯下降(P＜0.01)，過表達(dá)組Galectin-3蛋白的表達(dá)水平較空白組和過表達(dá)陰性對(duì)照組明顯上升（P＜0.01）。
　　干擾慢病毒和過表達(dá)慢病毒感染HH后，分別在24h、48h、72h檢測(cè)細(xì)胞的吸光

11、度值（OD值），CCK-8試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示干擾組的OD值較空白組和干擾陰性對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，干擾陰性對(duì)照組與空白組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);過表達(dá)組的OD值較空白組和過表達(dá)陰性對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，過表達(dá)陰性對(duì)照組與空白組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　用Quantity One軟件分別對(duì)p-GSK-3β、GSK-3β、p-β-catenin、β-catenin

12、、Axin和β-actin蛋白的電泳條帶進(jìn)行灰度分析。結(jié)果顯示，干擾組Axin蛋白和GSK-3β、p-β-catenin蛋白水平較空白組和干擾陰性對(duì)照組沒有明顯差異(P＞0.05)，干擾組p-GSK-3β、β-catenin蛋白水平較空白組和干擾陰性對(duì)照組明顯下降(P＜0.001);過表達(dá)組Axin蛋白和GSK-3β、p-β-catenin蛋白水平較空白組和過表達(dá)陰性對(duì)照組沒有明顯差異(P＞0.05)，而過表達(dá)組p-GSK-3β、β-c