慢性低氧高二氧化碳大鼠骨骼肌自噬的改變及其機制探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本實驗通過調節(jié)氧艙內的氧濃度及二氧化碳濃度建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型,模擬人類慢性阻塞性肺疾病(COPD)的病理生理特點。通過HE染色觀察骨骼肌形態(tài),Western-Blot法檢測骨骼肌HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達量,Real-Time RCR法檢測HIF-1αmRNA、BNIP3 mRNA、Beclin1 mRNA的含量。本實驗意在觀測慢性低氧高二氧化碳條件對自噬的影響,并探討其可能機

2、制。
  方法:
  本實驗采用慢性低氧高二氧化碳的動物模型,將32只6周齡SPF級雄性SD大鼠,體重180~220g,通過隨機數(shù)字表分成2組,分別為常氧對照組(normalcontrol group,NC組,n=16)、低氧高二氧化碳造模組(intermittenthypoxia/hypercapnia,HH組,n=16)。造模組大鼠置于常壓低氧高二氧化碳艙內(通過氮氣維持氧濃度9~11%,輸入CO2使艙內二氧化碳濃度保持

3、5~6%),每天8小時,每周6天,持續(xù)2周,其余時間與對照組在同一室內(室溫20~23℃,相對濕度50%~70%);對照組生活在正常大氣環(huán)境中,其他飼養(yǎng)條件兩組相同。在造模前后分別測量大鼠體重。造模完成后,大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,打開胸腔,經左心室生理鹽水灌注,完整取出右側股四頭肌,取材后立即保存于液氮中。每組取4只大鼠股四頭肌,4%多聚甲醛固定,做常規(guī)石蠟包埋。全部過程迅速完成。用蘇木精—伊紅染色法(HE染色)觀察骨骼肌肌

4、纖維的形態(tài)改變;Western blot技術分別檢測兩組大鼠骨骼肌HIF-1α、Beclin1、BNIP3、LC3的蛋白表達;實時熒光定量PCR技術測定兩組大鼠HIF-1αmRNA、BNIP3mRNA、Beclin1 mRNA的含量。
  結果:
  1、大鼠體重
  造模前,對照組與實驗組大鼠體重無統(tǒng)計學差異;造模2周后,造模組和對照組體重均較前增加,與對照組相比,實驗組體重明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)

5、;
  2、骨骼肌形態(tài)
  對照組大鼠鼠骨骼肌肌纖維形態(tài)正常,規(guī)則;實驗組大鼠骨骼肌肌纖維排列紊亂、斷裂,局部有萎縮、變細,脂肪沉積;
  3、HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達量
  與對照組相比,造模組HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
  4、HIF-1α mRNA、BNIP3 mRNA、Beclin1 mRNA

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