1、抗原檢測在微生物感染和重大疾病的診斷、疾病進展的監(jiān)測、藥物療效觀察和耐藥性監(jiān)測以及食品衛(wèi)生等領域中至關重要。熒光標記、酶標記和放射性同位素標記這三大抗體標記技術是目前免疫化學、免疫學以及分子生物學中應用最廣的常規(guī)抗原檢測手段。但在微量抗原檢測上,熒光標記及酶標記技術還缺乏足夠的靈敏性。放射性同位素標記技術在實際操作中由于需要特殊的設備和安全防護,因此限制了它在實際過程中的廣泛應用。
　　 本課題研究一種免疫檢測方法,用納米金珠探

2、針檢測抗原,將免疫信號轉化成核酸信號,然后通過吖啶酯雜交保護實驗檢測DNA的量從而獲知抗原的水平。本課題完成了以下研究內容:
　　 1.制備了納米金磁探針。納米金磁微粒具有超順磁性和金表面生物分子固定化的性能,操作簡單,而且,可以很好地解決生物大分子在微流控芯片微通道中的操縱。每個納米金磁可包被抗體2-3個。根據(jù)ELISA的檢測結果,包被到納米金磁上的抗體保留了免疫活性,為后續(xù)的抗原檢測做好了準備。
　　 2.制備了納米

3、金珠探針。利用納米金珠標記抗體和報告DNA,可以將免疫信號轉換為核酸分子信號,對提高檢測的靈敏度起到了十分重要的作用。納米金珠包被抗體的蛋白用量為3μg/ml,即每個納米金珠表面包被抗體1-2個。免疫斑點實驗證明,經(jīng)抗體和DNA修飾后的納米金珠,其表面抗體沒有失去活性。
　　 3.應用吖啶酯雜交保護實驗(HPA)檢測報告DNA。應用化學發(fā)光標記物吖啶酯(AE)標記寡核苷酸探針與基因轉錄產(chǎn)物靶序列雜交,并通過堿性水解試劑消除未雜交

4、探針的化學發(fā)光能力來達到分離的效果,通過堿性水解的方法,6分鐘可以將背景信號降低3個數(shù)量級,無需轉移分離,簡化了操作步驟,可以檢測達到amol級寡核苷酸。基于納米顆粒和吖啶酯雜交保護實驗的抗原檢測方法,可以檢測到320pg/ml羊抗鼠IgG-HRP抗原。
　　 本課題所研究的基于納米微粒系統(tǒng)及吖啶酯雜交保護實驗的抗原檢測方法,具有操作簡單,便于自動化等優(yōu)勢,同時該方法也可用于其他疾病的免疫檢測。本課題制備的納米金磁探針和納米金珠