1、研究背景：
　　血腦屏障(blood-brainbarrier，BBB)主要是由血管內皮細胞、基底膜、星形膠質細胞終足構成的一道擴散屏障，幾乎存在于整個腦組織。腦毛細血管內皮細胞與身體其他部位內皮細胞不同，細胞之間沒有孔隙，取而代之的是細胞間的緊密連接(tightjunction,TJ)。腦毛細血管內皮細胞缺乏囊泡胞飲系統(tǒng)[1]，但含有豐富的酶系統(tǒng)，可以分解各種藥物及營養(yǎng)物質，構成了一道酶屏障[2]。正是由于腦內毛細血管內皮細胞這

2、些特殊結構使得BBB能在保護腦組織不受外界傷害性刺激影響的同時也將許多治療性藥物拒之門外[3]。因此近幾年開發(fā)了很多增加BBB通透性的方法來幫助藥物、抗體、基因成功地透過BBB進入腦組織。有體外實驗研究證實超聲能夠用來打開血-組織屏障，使大分子和基因能夠穿過細胞質膜[4]。此外高強度聚焦超聲也可以用于選擇性的開放大鼠BBB。在超聲照射前給予一定量微泡造影劑，因為超聲空化核的引入可以降低超聲開放BBB時所需要的超聲能量，從而可以減少組織損

3、害的風險并使該技術能夠通過完整的顱骨實施BBB能夠可逆性的開放BBB而不引起神經細胞的急性損傷。而目前尚無診斷超聲聯(lián)合超聲造影劑SonoVue開放血腦屏障的報道。因此本實驗就將就這一空白進行研究，并進一步探討SonoVue介導UC開放BBB的安全性。
　　目的
　　首先驗證超聲造影劑聲諾維（SonoVue）介導診斷超聲（diagnosticultrasound，DU）增加大鼠BBB通透性的可行性與可逆性，同時進行動脈血氣分析

4、檢測該方法是否會對大鼠循環(huán)系統(tǒng)產生影響。隨后使用組織學染色來觀察本實驗條件的超聲造影（ultrasoniccontrast，UC）是否會造成大鼠神經細胞的壞死及紅細胞的滲出。最后通過Morris水迷宮實驗（Morriswatermaze,MWM）來檢測大鼠學習記憶功能進一步評估本實驗開放BBB方法的安全性。
　　方法
　　實驗一、SonoVue介導DU開放大鼠BBB可行性和可逆性研究以及對大鼠動脈血氣的影響
　　1.S

5、onoVue介導DU開放大鼠BBB可行性
　　根據(jù)處理方法的不同將32只大鼠隨即分為四組，每組8只：Con組大鼠僅進行麻醉、備皮、靜脈置管，而不進行其他操作直接給予伊文思藍（Evensblue，EB）；單純超聲組動物進行麻醉、備皮、靜脈置管后給予生理鹽水，然后進行超聲10min，并同時注射EB；單純造影劑組大鼠在麻醉、備皮、靜脈置管后直接給予SonoVue，10min后靜脈注射EB；UC組大鼠在進行麻醉、備皮、靜脈置管后，靜脈注射

6、SonoVue同時開始UC10min，超聲結束即刻給予EB。
　　2.SonoVue介導DU開放大鼠BBB的可逆性
　　為確定BBB開放是否可逆，根據(jù)時間不同又將實驗動物隨機分為4組：2h、4h、6h、8h組，分別于UC后的2h、4h、6h、8h注射EB檢測當時BBB開放情況，每組SD大鼠8只。
　　3．SonoVue介導DU開放BBB對大鼠動脈血氣的影響
　　隨機抽取8只進行UC的大鼠，每只大鼠分別于UC前、U

7、C5min、UC后即刻抽取動脈血1ml檢測其動脈血PO2、PCO2、PH等指標。
　　實驗二SonoVue介導DU開放BBB對大鼠腦組織神經細胞的影響
　　三只雄性SD大鼠經UC開放BBB后取腦切片進行HE染色，在顯微鏡下觀察神經細胞是否有壞死及是否有紅細胞滲出。
　　實驗三SonoVue介導DU開放BBB對大鼠學習記憶功能的影響
　　實驗動物隨機分為三組，每組8只大鼠：Con組,該組大鼠不做任何處理直接進行MM

8、W；假手術組，該組大鼠僅進行麻醉、備皮、靜脈置管，而不給予UC，并于麻醉后24h開始進行MWM實驗；UC組：該組大鼠進行麻醉、備皮、靜脈置管、給予UC，并于超聲后24h開始進行MWM實驗。
　　結果
　　1.SonoVue可以介導DU局灶性的開放大鼠BBB，主要表現(xiàn)在超聲輻照區(qū)局部EB滲出；且這一通透性的改變是可逆的，BBB的開放可以持續(xù)4h。
　　2.大劑量SonoVue不會影響大鼠動脈血氣的變化。
　　3.本

9、實驗參數(shù)不會對超聲輻照區(qū)域大鼠神經細胞產生損害，不會造成腦血管內皮細胞損害使紅細胞滲出。
　　4.通過對大鼠進行MWM實驗可觀察到UC開放BBB后的大鼠在定位航行實驗中與Con組和Sham組相比逃逸潛伏期縮短，上臺前距離縮短；在最后一天空間探索實驗中的目標象限停留時間延長。證明UC開放BBB后的大鼠其空間學習與記憶能力都有所提高。
　　結論
　　本實驗首先通過EB滲透法證明超聲造影劑聲諾維介導診斷超聲可以局部開放大鼠B