1、目的:口腔黏膜癌前病變與口腔癌的發(fā)生密切相關(guān),近些年來,為了降低口腔癌的發(fā)病率,人們越來越重視對口腔黏膜癌前病變的預防和治療。目前,口腔黏膜癌前病變的治療手段較多,主要分為藥物治療和非藥物治療。非藥物治療如手術(shù)治療、激光治療、冷凍治療等等,有著適應(yīng)證的局限性。而西藥治療如:增生平、維甲酸等等,長期服用可能會出現(xiàn)一些毒副作用。近年來研究表明,中醫(yī)中藥治療口腔黏膜癌前病變顯示出明顯的臨床效果,也成為目前口腔黏膜癌前病變研究的熱點。本課題通過

2、建立口腔黏膜癌前病變動物模型,應(yīng)用電鏡和免疫組化的方法觀察中藥蘚化飲對口腔黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 方法:選取SPF級ING敘利亞金黃地鼠55只,鼠齡六周,體質(zhì)量80g。按完全隨機設(shè)計方法將動物分為:空白對照組5只和實驗組50只。實驗組用于建立口腔黏膜癌前病變動物模型,其中又分為癌前病變對照組10只、蘚化飲治療組30只、生理鹽水治療對照組10只。將實驗組50只動物,頰囊黏膜涂以0.5％DMBA丙酮溶液,每周3次,連續(xù)涂藥6

3、周后,蘚化飲治療組、生理鹽水治療對照組分別灌胃治療。治療8周時,各組同步取材。采用電鏡及免疫組化方法,觀察中藥蘚化飲對金黃地鼠頰黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 結(jié)果:
　　 1癌前病變動物模型的建立
　　 實驗組50只動物頰黏膜致癌六周后,雙側(cè)頰黏膜肉眼觀全部為充血、糜爛、條索狀皺折等表現(xiàn)。隨機切取10例不同肉眼表現(xiàn)的部分病變部位,HE染色后觀察,上皮黏膜表現(xiàn)為不同程度的異常增生。由此說明,經(jīng)DMBA丙酮溶液致癌

4、六周后,已成功建立金黃地鼠頰黏膜癌前病變的動物模型。
　　 2蘚化飲對敘利亞金黃地鼠口腔黏膜癌前病變的逆轉(zhuǎn)作用
　　 2.1肉眼觀察
　　 空白對照組金黃地鼠頰黏膜表面光滑,呈淡粉色,透亮具有彈性,血管清晰。實驗組50只動物涂DMBA丙酮溶液六周后,頰黏膜變得粘連、粗糙、無彈性、充血糜爛,甚至可見條索狀皺折。中藥蘚化飲灌胃八周后,可見頰黏膜皺折減輕,黏膜表面逐漸光滑,充血糜爛面基本消失,但彈性較正常稍差。生理鹽水

5、灌胃治療八周后與治療前無明顯改變。
　　 2.2光鏡觀察
　　 空白對照組金黃地鼠頰黏膜為角化的復層鱗狀上皮,上皮和肌層之間為薄層結(jié)締組織及少量散在的纖維細胞和血管。停涂DMBA丙酮溶液八周后,鏡下觀察金黃地鼠頰黏膜可見不同程度的異常增生。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,黏膜上皮層次逐漸清晰,上皮層數(shù)逐漸恢復正常,基底層細胞排列比較有規(guī)則,異型性的細胞減少。生理鹽水灌胃治療八周后與治療前無明顯改變。
　　 2.3掃描電

6、鏡觀察
　　 空白對照組金黃地鼠頰黏膜上皮表現(xiàn)為多邊形細胞,細胞間橋很明顯,個體細胞表面顯示很多網(wǎng)狀排列的微嵴,微嵴圍成均勻一致的小窩,整個細胞表面呈現(xiàn)一種蜂窩狀外觀。停涂DMBA丙酮溶液八周,細胞外形更不規(guī)則,細胞重疊,松解現(xiàn)象更為突出,微嵴腫脹變寬,不規(guī)則排列,呈卵石狀外觀,蜂窩狀結(jié)構(gòu)完全消失。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,細胞外形逐漸清晰,呈現(xiàn)出多邊形。細胞表面大部分區(qū)域呈現(xiàn)蜂窩狀結(jié)構(gòu),可見連續(xù)的細胞界限。生理鹽水灌胃治療八周

7、與治療前無明顯改變。
　　 2.4透射電鏡觀察
　　 空白對照組金黃地鼠頰黏膜上皮細胞外形規(guī)則,細胞緊密相鄰,橋粒豐富,張力纖維發(fā)育正常,基底膜完整。停涂DMBA丙酮溶液八周后,可見細胞間隙增寬,橋粒大量減少,張力纖維減少,細胞外形不規(guī)則,核仁邊集,核外形不規(guī)則,核膜內(nèi)陷,可見基底膜斷裂。中藥蘚化飲灌胃治療八周后,增寬的細胞間隙逐漸減小,橋粒和張力纖維逐漸豐富,細胞外形逐漸規(guī)則。生理鹽水灌胃治療八周與治療前無明顯改變。<

8、br>　　 3蘚化飲治療后EZH2、PCNA在各組免疫組化染色結(jié)果
　　 EZH2、PCNA在空白對照組和蘚化飲治療組低表達,而在癌前病變對照組和生理鹽水治療對照組高表達。癌前病變對照組EZH2、PCNA高表達率與空白對照組相比,有顯著性差異(P＜0.05);蘚化飲治療組EZH2、PCNA高表達率與癌前病變對照組相比,有顯著性差異(P＜0.05);而蘚化飲治療組EZH2、PCNA高表達率與空白對照組相比,無顯著性差異(P＞0.

9、05);生理鹽水治療對照組EZH2、PCNA高表達率與蘚化飲治療組相比,有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 統(tǒng)計學分析,兩指標表達具有相關(guān)性,表達吻合度具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論:
　　 1使用0.5％DMBA丙酮溶液涂抹敘利亞金黃地鼠頰黏膜六周后,能成功建立金黃地鼠頰黏膜癌前病變動物模型。
　　 2蘚化飲治療八周后,敘利亞金黃地鼠頰黏膜充血糜爛面基本消失,細胞外形逐漸清晰,上皮層異型性的細胞減少,E