1、動物克隆的效率非常低可能是由于供體核重編程的不徹底或不適當造成的。雌性動物個體有兩條X染色體，為了達到劑量平衡必須要失活其中的一條，在這一過程中，涉及復雜的表觀修飾的變化。Xist(X inactivation-specific transcript)基因是X染色體失活啟始的一個關鍵基因，沒有它的表達，X染色體失活就不能正常啟始。DNA甲基化是基因組中的一種重要的表觀修飾，能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄活性，很多研究已經(jīng)提出哺乳動物無活性的X染色體的

2、Xist基因全甲基化，而失活的全不甲基化，因此，Xist基因的活性與DNA甲基化非常相關。 我們這一研究的目的是檢測在圍產(chǎn)期死亡克隆牛和出生后死亡的克隆牛中Xist基因的DNA甲基化是否存在某些差異，如果有，這種差異是否影響其對應Xist基因的轉(zhuǎn)錄。通過預測，在靠近Xist基因啟動子的區(qū)域找到了唯一一個CpG島。在該研究中，我們所使用的樣品是正常牛和克隆牛的心、肝、脾、肺和腎五種組織。依據(jù)我們的試驗結果，從不同牛分組的Xist基

3、因CpG島平均的甲基化水平來看，無論是圍產(chǎn)期死亡克隆牛，還是出生后死亡克隆牛都比正常對照牛的低。而且出生后死亡克隆牛的比圍產(chǎn)期死亡克隆牛的還低。除此之外，我們還檢測了兩頭雄性正常牛Xist基因的甲基化水平，結果發(fā)現(xiàn)，在雄性正常牛的五種組織中，Xist基因CpG島基本都處于高甲基化狀態(tài)(平均水平高于90％)。我們用熒光定量-反轉(zhuǎn)錄PCR的方法來檢測Xist基因的轉(zhuǎn)錄水平，然而，意外的是，從平均水平來看，Xist基因DNA甲基化程度高的樣品

4、的Xist轉(zhuǎn)錄水平也高。這有可能是因為DNA甲基化在此階段不能調(diào)節(jié)Xist的轉(zhuǎn)錄，或者DNA甲基化程度的降低還不足以使Xist的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生改變，也有可能是因為在這個階段DNA甲基化外的其他表觀修飾在調(diào)控Xist基因的轉(zhuǎn)錄水平上起更人作用，還有可能DNA甲基化主要用來預防Xist基因的意外轉(zhuǎn)錄，其具體作用還有待深入研究。另外，通過檢測，Xist基因在雄性正常牛和克隆牛五種組織中幾乎不轉(zhuǎn)錄，因此Xist基因在雄性正常牛和克隆牛的各組織中是