1、糞腸球菌（Enterococcus faecalis, E. faecalis）作為引起根管治療失敗的主要致病菌之一，具有較強的耐藥性和生存力，單純機械預備很難完全清除根管內E. faecalis感染，且其對臨床常用根管消毒藥物反應不敏感。因此，尋求一種有效對抗根管內E.faecalis感染的新方法或輔助手段已成為滿足牙髓治療需要的必然趨勢。光動力療法（Photodynamic Therapy, PDT）作為具有應用前景的新型抗感染策略

2、之一，已在對抗全身感染性疾病（如皮膚感染及骨科感染）中取得良好進展，故本研究擬探討其應用于控制根管糞腸球菌感染的可行性。本研究首先通過體外實驗觀察其對人牙周膜成纖維細胞（Human Periodontal Ligament Fibroblasts, hPDLFs）的毒性作用考察其生物安全性，再利用菌落計數法及掃描電鏡（Scanning Electron Microscope, SEM）評估該療法對浮游狀態(tài)E.faecalis及根管感染模

3、型中細菌生物膜的抗菌性能，旨在探索PDT用于根管消毒的安全性和可行性。同時，本研究還觀察比較了兩種不同劑型MB介導的PDT，以及不同光照方式介導的PDT的抗菌效應，從而分析影響PDT抗菌療效的相關因素。本文從以下幾個方面進行論述。
　　實驗一兩種劑型亞甲基藍光動力療法對人牙周膜成纖維細胞的體外毒性研究
　　目的：研究兩種劑型MB介導的PDT對體外培養(yǎng)的hPDLFs的毒性作用。方法：將體外培養(yǎng)的hPDLFs分別加入兩種劑型MB

4、中（光敏劑終濃度分別為0.1，1.0，10，25，50μmol/L），孵育10min后，選擇波長670nm半導體激光器照射5min，輸出功率40mW，光照能量為12J。光照結束后繼續(xù)培養(yǎng)24h，用噻唑藍（MTT）比色法計算細胞相對增殖率從而反映兩種劑型MB的細胞毒性，光鏡下觀察細胞形態(tài)學變化。結果：兩種劑型MB介導的PDT對體外培養(yǎng)的hPDLFs的毒性作用未見明顯差異（P>0.05）。當MB濃度≤25μmol/L時，細胞毒性為1~2級，

5、光鏡下觀察細胞未發(fā)生明顯形態(tài)學改變；濃度≥50μmol/L時，細胞毒性為3級，可觀察到細胞皺縮、變圓。結論：PDT對hPDLFs的毒性作用受光敏劑濃度影響，適當濃度的兩種劑型MB介導的PDT對體外培養(yǎng)的hPDLFs影響輕微。
　　實驗二兩種劑型亞甲基藍光動力療法對糞腸球菌的體外抗菌研究
　　目的：體外研究兩種劑型MB介導的PDT對浮游狀態(tài)E. faecalis的抗菌效應。方法：以浮游狀態(tài)E.faecalis作為實驗對象，將濃

6、度為100μmol/L的兩種劑型MB孵育10min后，選擇波長670nm半導體激光器照射5min，輸出功率為50mW，光照能量為15J。采用菌落計數法檢測兩種劑型MB介導的PDT對E.faecalis的殺傷作用。結果：水劑型MB和混合劑型MB介導的PDT對E.faecalis的抗菌率分別為99.976％和99.982%，二者相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；單獨光照組及暗毒性組對E. faecalis的殺傷作用不如PDT組（P<

7、0.05）。其中單獨光照組抗菌率為67.5%，暗毒性組抗菌率分別為71.69%（水劑型MB）和73.67%（混合劑型MB）。結論：兩種劑型MB介導的PDT對體外培養(yǎng)的E.faecalis具有明顯殺傷作用，且只有光源與光敏劑聯合使用方能達到最佳效應。
　　實驗三不同光照方式介導的光動力療法對牛牙糞腸球菌根管感染模型的體外抗菌研究
　　目的：體外研究兩種不同光照方式介導的PDT對根管內E.faecalis感染的抗菌效應。方法：以

8、水劑型MB為光敏劑，將成功建立根管E. faecalis感染模型的18個牛牙樣本隨機分為2組每組9個樣本，分別采用不同光照方式進行PDT處理即：光導纖維置于根管口照射及光導纖維置于根管內距離根尖約1mm處照射。所有實驗樣本均接受波長為670 nm的半導體激光器照射5min，其輸出功率設置為50mW，光照能量15 J。于實驗前、后分別取樣，即刻培養(yǎng)檢測根管內E.faecalis數目，通過菌落計數法檢測兩種光照方式介導的 PDT對根管內 E

9、. faecalis感染的抗菌率。結果：光導纖維置于根管口照射和根管內照射的抗菌率分別為95.23%和95.89%，二者相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：在相同光照參數條件下，PDT的抗菌效應不受光導纖維在根管內的位置影響。
　　實驗四兩種劑型亞甲基藍光動力療法對牛牙糞腸球菌根管感染模型的體外抗菌研究
　　目的：體外研究兩種劑型MB介導的PDT對根管內E. faecalis感染的抗菌效應。方法：建立牛牙根管E.

10、faecalis感染模型后，隨機將45個牛牙樣本分為5組每組9個樣本，分別采用不同消毒方法即：超聲沖洗組（2.5%NaOCl溶液）， PDT組（水劑型MB、混合劑型MB），超聲沖洗聯合PDT組（水劑型MB、混合劑型MB）。5組實驗中，除超聲沖洗組外其余樣本均接受波長為670nm的半導體激光器照射5min，輸出功率設置為50mW，光照能量15J。于根管消毒前、后取樣，即刻培養(yǎng)檢測根管內E.faecalis數目；實驗結束后，每組隨機選取3個

11、樣本 SEM觀察根管牙本質小管內殘存細菌的形態(tài)。結果：5組實驗中，超聲沖洗聯合PDT處理抗菌率最高，分別為99.96%（水劑型MB）和99.92%（混合劑型MB），其抗菌作用明顯優(yōu)于單獨水劑型MB介導的PDT組（抗菌率95.89%）（P<0.05），但與其他組相比較（單獨超聲沖洗組抗菌率99.46%，單獨混合劑型MB介導的PDT組抗菌率98.3%），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。SEM觀察發(fā)現經不同方法消毒處理后實驗組絕大多數細菌均