1、脊髓損傷(spinalcordinjury,SCI)是一種臨床上常見的高致殘性疾病，也是臨床疑難病癥之一，其治療困難，方法不一。目前大量研究發(fā)現(xiàn)嗅鞘細胞(olfactoryensheathingcells，OECs)移植能夠促進脊髓損傷后軸突再生和神經功能修復，被認為是治療脊髓損傷最有前景的細胞之一。前期實驗研究已證實嗅鞘細胞靜脈移植治療急性脊髓損傷有較好的療效，與局部移植療效相似。本實驗擬通過嗅鞘細胞靜脈移植治療急慢性SCI，研究OE

2、Cs靜脈移植劑量與其療效的關系，以及其治療陳舊性脊髓損傷的療效，為臨床應用嗅鞘細胞靜脈移植治療急性和陳舊性脊髓損傷提供理論依據。
　　 第一部分:
　　 不同劑量嗅鞘細胞靜脈移植治療急性脊髓損傷的實驗研究
　　 目的:
　　 研究和探討嗅鞘細胞靜脈移植劑量與其治療急性SCI的療效的關系，探求較佳的靜脈移植劑量。
　　 方法:
　　 1.嗅鞘細胞的原代培養(yǎng)、純化與鑒定、細胞標記和計數:

3、>　　 根據改良Nash差速貼壁法和Ara-c抑制法相結合的方法進行嗅鞘細胞的原代培養(yǎng)和純化，并應用NGFRp75和GFAP鑒定OECs。消化收集細胞并用雙苯亞甲胺標記細胞核，計數板計數備移植用。
　　 2.脊髓損傷動物模型的制備、分組:
　　 制備wistar大鼠T10左側脊髓半切損傷模型，隨機分成5組（每組10只）:嗅鞘細胞大劑量靜脈移植組（A組）、嗅鞘細胞中劑量靜脈移植組（B組）、嗅鞘細胞小劑量靜脈移植組（C組）

4、、D/F12細胞培養(yǎng)液移植組（D組）、空白對照組（E組）。
　　 3.神經功能評價:
　　 分別于術后第1d、1w、2w、3w、4w、6w、8w、10w，通過聯(lián)合行為學評分(CBS評分法），對每組大鼠分別進行后肢的運動、感覺功能評分，評價脊髓神經功能恢復情況。分別于術后4周、10周，于各組隨機抽取2只大鼠進行脊髓組織取材、切片，通過HE染色、嗜銀染色，觀察脊髓損傷區(qū)域瘢痕增生以及神經纖維軸突再生情況并記錄，比較各組神經纖

5、維軸突再生數量、形態(tài)以及跨越損傷部位的情況，通過神經生長因子受體(NGFRp75)免疫組化染色檢測OECs在SCI區(qū)域的存活、分布情況。
　　 結果:
　　 CBS評分顯示A組、B組從第2周開始在每個時間段與C組、D組、E組相比均有顯著性差異(p＜0.05)。A組、B組之間沒有顯著性差異(p＞0.05)，D組、E組之間沒有顯著性差異(p＞0.05)，C組與D組、E組之間差異雖有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，但是均數差別較小

6、。
　　 鏡下觀察:A組、B組在脊髓損傷部位有較多神經纖維軸突再生，并且部分再生軸突能夠通過損傷部位的瘢痕組織;C組、D組、E組僅有極少量神經纖維軸突再生，但未發(fā)現(xiàn)有再生軸突通過瘢痕組織。A組、B組與C組、D組、E組有明顯差別，D組、E組差別不大，A組、B組差別不大。A、B兩組脊髓修復明顯好于C、D、E組，C組好于D、E組。
　　 結論:
　　 OECs靜脈移植治療急性脊髓損傷有一定的療效，并且療效與移植的細胞劑

7、量在一定范圍內成正向關系。OECs靜脈移植治療急性脊髓損傷較佳的移植劑量為2×106。
　　 第二部分:
　　 嗅鞘細胞靜脈移植治療陳舊性脊髓損傷的實驗研究
　　 目的:
　　 探討嗅鞘細胞靜脈移植治療陳舊性脊髓損傷的可行性以及療效
　　 方法:
　　 制備wistar大鼠T10左側脊髓半切損傷模型（不做任何處理，自行恢復1月），大鼠的神經功能恢復變緩慢，進入平臺期，并通過CBS評分法，每

8、只大鼠的評分在47分左右，隨機分成3組（每組10只）:嗅鞘細胞靜脈移植組（F組）、D/F12細胞培養(yǎng)液靜脈移植組（G組）、空白對照組（H組）。通過CBS評分法定期對大鼠的神經功能進行評價，通過組織形態(tài)學觀察脊髓損傷部位組織的修復情況。
　　 結果:
　　 CBS評分顯示:從第2周開始在每個時間段F組與G組、H組均有顯著差異(p＜0.05)，G、H組之間沒有顯著性差異(p＞0.05)。鏡下觀察可見:F組與G組、H組有明顯差