1、內(nèi)臟痛敏性疾病發(fā)病率極高，在女性尤其多見，且癥狀及對鎮(zhèn)痛藥物的反應(yīng)都隨性激素周期波動，提示雌激素對內(nèi)臟痛具有重要的調(diào)節(jié)作用，闡明雌激素的作用部位及細(xì)胞分子機(jī)制具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價值。延髓頭端腹內(nèi)側(cè)部(rostralventromedialmedulla，RVM)是腦干下行痛覺調(diào)制系統(tǒng)的核心結(jié)構(gòu)，其中的ON細(xì)胞和OFF細(xì)胞投射至脊髓背角，對外周傷害性刺激向中樞的傳遞分別起下行易化和下行抑制作用。我們的前期工作發(fā)現(xiàn)，向大鼠RVM

2、部位微量注射雌激素可增強(qiáng)內(nèi)臟傷害性感受反應(yīng)，并減弱嗎啡的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，表明雌激素能影響腦干下行調(diào)制系統(tǒng)對內(nèi)臟痛的內(nèi)源性調(diào)節(jié)。本研究的目的是闡明雌激素效應(yīng)的細(xì)胞與受體機(jī)制。
　　1.延髓頭端腹內(nèi)側(cè)部內(nèi)臟痛相關(guān)神經(jīng)元的功能特性
　　以往的研究根據(jù)RVM神經(jīng)元對軀體傷害性刺激的反應(yīng)，將之區(qū)分為ON、OFF和Neutral細(xì)胞，認(rèn)為ON和OFF細(xì)胞分別對軀體痛有易化和抑制作用，但迄今對于RVM神經(jīng)元的活動與內(nèi)臟痛的關(guān)系尚缺乏了解。因此，

3、我們在淺麻醉的雌性大鼠，細(xì)胞外記錄RVM神經(jīng)元放電活動，觀察了傷害性機(jī)械刺激內(nèi)臟期間神經(jīng)元放電活動的變化。共穩(wěn)定記錄了28個神經(jīng)元，它們分布在中縫大核（nucleusraphemagnus，RMg）和網(wǎng)狀巨細(xì)胞核(nucleusgigantocellularisreticularis，Gi)內(nèi)。在充脹結(jié)直腸(colorectaldistension，CRD，60mmHg，30s)期間，9個神經(jīng)元放電頻率顯著增高，符合ON細(xì)胞的特征，8個

4、神經(jīng)元放電頻率顯著降低，符合OFF細(xì)胞的特征，其余11個神經(jīng)元放電頻率沒有改變，符合Neutral細(xì)胞的特征。CRD引起的神經(jīng)元放電頻率的持續(xù)增加或降低均出現(xiàn)在充脹引起的腹肌放電反應(yīng)(稱為viscero-motorresponse，VMR)之前;并且神經(jīng)元對CRD刺激的反應(yīng)模式與燙尾引起的反應(yīng)模式相同。這些結(jié)果證明，RVM部位的“ON”和“OFF”細(xì)胞，不僅調(diào)節(jié)軀體痛，也分別下行易化和抑制內(nèi)臟傷害性感受。
　　2.雌激素對延髓內(nèi)臟

5、痛相關(guān)神經(jīng)元功能的調(diào)節(jié)作用
　　我們在前期工作中發(fā)現(xiàn)，向大鼠RVM部位微量注射雌激素可增強(qiáng)CRD引起的VMR，并減弱嗎啡對VMR的抑制作用。為明確雌激素效應(yīng)的細(xì)胞機(jī)制，我們在淺麻醉的雌性大鼠，采用多管微電極細(xì)胞外記錄RVM神經(jīng)元活動，觀察微電泳雌激素對ON、OFF和Neutral細(xì)胞自發(fā)放電活動的影響。我們發(fā)現(xiàn):1）微電泳17β-雌二醇(17β-E2)可迅速使全部ON細(xì)胞(8/8)和部分OFF細(xì)胞(4/11)放電增加，而對大部分O

6、FF細(xì)胞(7/11)和絕大部分Neutral細(xì)胞(6/7)的自發(fā)放電活動沒有明顯影響，17β-E2對ON細(xì)胞的興奮作用明顯強(qiáng)于對OFF細(xì)胞的興奮作用;2）微電泳17α-雌二醇(17α-E2)對ON細(xì)胞和OFF細(xì)胞的放電活動都沒有明顯的興奮或抑制作用;3）17β-E2可減弱嗎啡對ON細(xì)胞放電的抑制效應(yīng)，而皮質(zhì)酮(CORT)可增強(qiáng)嗎啡的抑制效應(yīng)。這些結(jié)果提示17β-E2可通過非基因組機(jī)制選擇性興奮ON細(xì)胞并抑制阿片肽信號通路，從而增強(qiáng)下行易

7、化系統(tǒng)的活動和內(nèi)臟傷害性感受。
　　3.雌激素效應(yīng)的受體機(jī)制
　　目前對于介導(dǎo)雌激素非基因組效應(yīng)的受體機(jī)制仍沒有結(jié)論。因此，我們采用免疫熒光法檢測了經(jīng)典雌激素受體ERα和ERβ以及新型雌激素受體GPR30在RVM部位的表達(dá)分布情況。在中縫大核（RMg）和網(wǎng)狀巨細(xì)胞核(Gi)均未檢測到ERβ的免疫活性;在RMg未檢測到ERα免疫活性，但Gi內(nèi)可見微弱的ERα的免疫熒光染色。與周圍核團(tuán)相比，RMg和Gi內(nèi)可見較強(qiáng)的GPR30免疫

8、活性，且GPR30僅表達(dá)在部分神經(jīng)元胞體和突起，膠質(zhì)細(xì)胞未見GPR30陽性染色。我們用熒光指示劑DiI逆行標(biāo)記投射到脊髓背角的RVM神經(jīng)元，用雙標(biāo)記免疫熒光法證明DiI陽性神經(jīng)元高表達(dá)GPR30免疫活性。采用雙標(biāo)記免疫熒光法還檢測到GPR30和μ型阿片受體(MOR)在RVM的許多神經(jīng)元上共存。為明確GPR30在亞細(xì)胞水平上的定位，檢測了GPR30與細(xì)胞膜和多種細(xì)胞器標(biāo)記物的共表達(dá)，發(fā)現(xiàn)GPR30主要分布于高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而不是細(xì)胞膜上