1、目的：
　　研究鹽酸甜菜堿(Bet)對高同型半胱氨酸血癥(HHcy)大鼠腦組織和原代海馬細胞損傷的保護作用及其機制。通過對HHcy大鼠血漿及腦組織勻漿中的SOD活性、LDH活性、MDA、NO及GSH含量進行測定，HE染色觀察HHcy大鼠腦組織形態(tài)學(xué)等方法研究Bet的保護作用。體外實驗通過檢測細胞生長抑制率和凋亡率，采用試劑盒測定細胞上清液SOD活性、MDA含量、LDH活性和細胞凋亡，Western Blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白Bc

2、l-2和Bax的表達，探討B(tài)et拮抗Hcy致大鼠原代培養(yǎng)海馬細胞損傷的作用機制。
　　方法：
　　1.Bet對HHcy大鼠腦組織的保護作用:采用2％蛋氨酸飼料喂養(yǎng)Wistar大鼠，制備大鼠高同型半胱氨酸血癥模型。分組如下:正常對照組（標(biāo)準(zhǔn)飼料，生理鹽水）、模型組(HHcy)（高蛋氨酸飼料，生理鹽水），鹽酸甜菜堿高、中、低濃度組(高蛋氨酸飼料，甜菜堿劑量200、100、50mg/Kg)，大鼠尾部取血離心取血清，檢測大鼠血清同型

3、半胱氨酸的含量。灌胃Bet60天后麻醉處死，檢測血漿及腦組織勻漿SOD、MDA、NO、GSH、LDH及NO水平，HE染色觀察大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化。
　　2.Bet對原代培養(yǎng)大鼠海馬細胞的保護作用:采用低濃度胰蛋白酶消化靜置提取海馬細胞，高糖DMEM培養(yǎng)原代海馬細胞的方法。原代海馬細胞分組如下:正常對照組:高糖DMEM培養(yǎng)基;同型半胱氨酸(Hcy)損傷組（模型組）:16mmol/LHcy;鹽酸甜菜堿高中低濃度組:16mmol/L H

4、cy+12.5mmol/L Bet(25mmol/L Bet，50mmol/LBet)。甜菜堿各組在Hcy損傷前Bet預(yù)處理12h，Hcy作用12h，采用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化，MTT法檢測細胞的增殖。藥物對細胞凋亡的影響采用流式細胞儀檢測凋亡率及試劑盒細胞上清液中LDH的釋放，氧化應(yīng)激指標(biāo)采用比色法檢測細胞上清液中SOD活性和MDA含量。Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax的表達。
　　結(jié)果：

5、>　　1.Bet對HHcy大鼠腦組織的保護作用:利用高蛋氨酸飼料飲食建造大鼠高同型半胱氨酸血癥動物模型。利用鹽酸甜菜堿灌胃治療，結(jié)果鹽酸甜菜堿組血漿及腦組織SOD、MDA、NO、GSH的變化與模型組比較均變化顯著(P＜0.01); HE染色結(jié)果表明甜菜堿組與模型組相比，模型組腦組織病理狀態(tài)明顯得到改善，明顯保護受損的腦組織。
　　2.Bet對原代培養(yǎng)大鼠海馬細胞的保護作用:建立體外培養(yǎng)海馬細胞的方法并且鑒定成功，同型半胱氨酸損傷濃

6、度為16mmol/L，鹽酸甜菜堿的保護濃度分別為12.5、25、50mmol/L，流式細胞儀檢測細胞凋亡率甜菜堿組細胞凋亡率明顯低于模型組，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，MTT法結(jié)果與模型組比較，Bet各組細胞死亡率降低，Western-blot法結(jié)果與模型組比較，Bet組升高Bcl-2蛋白的表達、降低Bax蛋白的表達，具有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.建立大鼠高同型半胱氨酸血癥動物模型。
　　2.與對照組比較，

7、高同型半胱氨酸血癥模型大鼠的大腦皮質(zhì)和海馬組織有明顯的病理變化，甜菜堿組的組織病理狀態(tài)與模型組比較損傷減輕。表明甜菜堿對高同型半胱氨酸所致的腦組織損傷具有保護作用。
　　3.高同型半胱氨酸血癥模型大鼠與正常對照組比較，血漿與腦組織中SOD活性降低，同時GSH含量減少，MDA和NO水平明顯增高，甜菜堿組與模型組比較血漿與腦組織勻漿中SOD活性和GSH含量明顯提高，MDA和NO水平下降。表明甜菜堿保護同型半胱氨酸損傷的機制可能是通過提

8、高腦組織抗氧化能力途徑發(fā)揮作用。
　　4.建立體外提取、培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)細胞的方法并且鑒定成功。低濃度Hcy可以促進細胞生長，高濃度Hcy可以抑制細胞生長，從而促進細胞凋亡;Bet能夠降低Hcy誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元細胞的凋亡率，降低Hcy對神經(jīng)元造成的損傷。
　　5.Bet可以提高同型半胱氨酸損傷的神經(jīng)細胞SOD活力，降低同型半胱氨酸損傷的細胞MDA含量，通過降低氧化應(yīng)激反應(yīng)來保護高同型半胱氨酸對原代海馬細胞的損傷。