1、目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一極常見的自身免疫性疾病,狼瘡性腎炎(Lupus nephritis,LN)是本病致殘、致死的主要原因。雖然SLE的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,但公認(rèn)淋巴細(xì)胞功能異常和細(xì)胞因子分泌失衡所致機(jī)體免疫功能紊亂是其發(fā)病機(jī)制的核心,新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子高遷移率族蛋白1(high mobility group proteinboxl,HMGB1)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的

2、作用也倍受關(guān)注。作為一種重要的晚期炎癥介質(zhì),HMGB1參與了類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、干燥綜合癥等多種自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展[2-3]。我們前期的實(shí)驗(yàn)通過研究HMGB1在狼瘡性腎炎患者外周血的水平以及HMGB1對人系膜細(xì)胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)HMGB1是狼瘡腎炎發(fā)病過程的重要的細(xì)胞因子之一,與系膜細(xì)胞增生有關(guān)[8]。但其在狼瘡性腎炎腎組織中的表達(dá)變化及可能的作用機(jī)制目前尚缺乏深入研究,因此本實(shí)驗(yàn)采用BXSB小鼠模型為研究對象,通過觀察HM

3、GB1及其Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)及NF-κB在腎組織中的表達(dá)變化,并分析它們之間的相關(guān)性,初步探討HMGB1/TLR/NF-κB途徑在狼瘡性腎炎發(fā)病中的信號調(diào)控作用。
　　 方法:
　　 選取11周齡、體重18～22g的雄性BXSB小鼠(狼瘡性腎炎模型組)和C57BL/6小鼠(正常對照組)為研究對象,于16周齡時通過眼眶內(nèi)眥靜脈取血,膀胱穿刺取尿后處死動物并取材,ELISA法檢測小

4、鼠血清中HMGB1蛋白的水平;PAS和透射電鏡觀察腎組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn);免疫組化檢測PCNA在腎組織中的表達(dá)變化;RT-PCR和免疫組化檢測腎組織中HMGB1、TLR2、TLR4mRNA和蛋白的表達(dá)變化;RT-PCR、Werstem Blot和免疫組化檢測NF-κBmRNA和磷酸化NF-κB在腎組織中表達(dá)和轉(zhuǎn)位情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.不同組小鼠腎功能比較
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠血清中BU

5、N和Upro水平均明顯升高(P均＜0.01);而SCr水平二者相比無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2.不同組小鼠血清中HMGB1蛋白的水平
　　 狼瘡性腎炎模型組小鼠血清中HMGB1蛋白的水平(0.57±0.03)明顯高于正常對照組(0.54±0.00)(P＜0.01)。
　　 3.不同組小鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織腎小球基底膜明顯增厚、足突融合、系膜基質(zhì)

6、增多。
　　 4.PCNA蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達(dá)
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中PCNA蛋白表達(dá)明顯升高,主要定位于腎小球細(xì)胞的細(xì)胞核。
　　 5.HMGB1mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達(dá)
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中HMGB1mRNA及蛋白表達(dá)均明顯升高(P均＜0.01),HMGB1蛋白主要位于腎小球細(xì)胞的胞漿和胞外;而在正常對照組小鼠腎臟

7、組織中僅腎小管上皮細(xì)胞胞核有少量表達(dá)。
　　 6.TLR2、4mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達(dá)
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中TLR2/4mRNA及蛋白表達(dá)均明顯升高,TLR2/4蛋白主要定位于腎小球細(xì)胞尤其是足細(xì)胞的細(xì)胞膜。
　　 7.NF-κBp65mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達(dá)和轉(zhuǎn)位
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中NF-κBp65mRNA

8、及磷酸化蛋白表達(dá)均明顯升高,P-NF-κBp65蛋白主要定位于腎小球細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核。
　　 8.相關(guān)性分析
　　 經(jīng)pearson相關(guān)分析,HMGB1蛋白與TLR2/4蛋白的表達(dá)水平之間呈正相關(guān)(r=0.911,P=0.012;r=0.854,P=0.000);TLR2/4蛋白與p-NF-κBp65蛋白的表達(dá)水平之間呈正相關(guān)(r=0.984,P=0.000;r=0.935,P=0.006);p-NF-κBp