1、本文目的： 探討褪黑素對成人CD4+T細(xì)胞活化的影響及其膜受體的作用。 方法： 1.褪黑素對CD4+T細(xì)胞活化的作用及其最適作用濃度的確立 隨機(jī)選擇10個正常、健康成年人，每人采集外周血10 ml(n=10)，分離、獲取淋巴細(xì)胞，依據(jù)所給MLT濃度不同每份標(biāo)本分成4組：分別加入的MLT濃度為0、100 pM、500 pM、和1 nM，每組均加入對氯苯丙氨酸(parachlorophenylalanine，

2、PCPA)10μM，以抑制淋巴細(xì)胞MLT的內(nèi)源性合成，并在8μg/ml植物凝集素(phytohemagglutinin，PHA)刺激下培養(yǎng)。于20 h后取部分培養(yǎng)細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測定CD4+CD69+細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比：72 h后取剩余部分細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測定CD4+CD25+和CD4+HLA-DR+細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比。經(jīng)配對資料t-test統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，以明確褪黑素有無刺激作用，這種作用有無明顯量效關(guān)系，最終確定褪

3、黑素合適的作用濃度。 2.褪黑素受體拮抗劑對MLT所致CD4+T細(xì)胞活化變化的影響 另外隨機(jī)采集27個正常、健康成年人外周血，每人10 ml(n=27)，分離、獲取淋巴細(xì)胞，按處理因素不同每份標(biāo)本分成5組：第一組空白對照組；第二組謎黑素(MLT,1 nM)組；第三組2-苯基-N-乙酰色胺(lzindole，LZI，MTI、MT2非選擇性拮抗，10μM+MLT(1 nM)組；第四組鹽酸哌唑嗪(prazosin hydroc

4、hloride，PRZ，MT3拮抗劑，20.4 nM)+MLT(1 nM)組；第五組LZI(10μM)+PRZ(20.4 nM)+MLT(1 nM)組。每組均加入PCPA(10μM)，以抑制淋巴細(xì)胞MLT的內(nèi)源性合成，并在PHA(8μg/ml)刺激下培養(yǎng)。于20 h后取部分培養(yǎng)細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測定CD4+CD69+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比和平均熒光強(qiáng)度(mean fluorescence intensity，MFI)；72 h后取

5、剩余部分細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測定CD4+CD25+和CD4+HLA-DR+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比和MFI。經(jīng)方差分析(ANOVA)檢驗統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，旨在觀察MLT及其受體拮抗劑對CD4+T細(xì)胞活化的影響。 結(jié)論： 1.外源性褪黑素能有效地增強(qiáng)PHA對成人CD4+T細(xì)胞的活化作用，并且褪黑素的這種作用存在著量效關(guān)系。 2.褪黑素并不能增加已活化的CD4+T細(xì)胞表面CD25、CD69、HLA-DR分子表達(dá)的數(shù)量。