1、本文擬選取皮膚癬菌、酵母菌、非皮膚癬菌性絲狀真菌中最常見(jiàn)的幾種甲真菌病致病菌，研究其與人甲體外的相互作用，通過(guò)建立的體外模型，探討非皮膚癬菌是否能單獨(dú)原發(fā)性侵犯離體甲板或與皮膚癬菌聯(lián)合侵襲甲板，明確非皮膚癬菌在甲真菌病中的地位。 目的： 1．觀察紅色毛癬菌、白念珠菌、深紅酵母、短帚霉、串珠鐮刀菌、煙曲霉、繩狀青霉7種真菌是否具有侵犯離體甲板的能力，并比較其侵襲能力的強(qiáng)弱。 2．建立離體甲板的真菌透甲模型，在此基礎(chǔ)

2、上觀察真菌透甲時(shí)間，探討紅色毛癬菌與短帚霉的相互作用。 方法： 第一部分： 1．將高溫滅菌的甲板36枚，隨機(jī)分為紅色毛癬菌、白念珠菌和短帚霉3組，每組12枚，分別置于相應(yīng)的固體沙堡培養(yǎng)基菌落中。28℃培養(yǎng)，12、24、48、72小時(shí)，每組取3枚甲板進(jìn)行20％NaOH加熱溶甲，鏡下觀察這3種真菌對(duì)甲板侵犯的程度。 2.將高溫滅菌的甲板294枚，隨機(jī)分為21組，每組14枚，分別置于紅色毛癬菌、白念珠菌、深紅酵

3、母、短帚霉、串珠鐮刀菌、煙曲霉、繩狀青霉7種菌的3種培養(yǎng)基(固體沙堡培養(yǎng)皿、液體沙堡試管及生理鹽水試管)中。28℃培養(yǎng)，分別于第4、7、20、30天每組取甲一枚，第10天每組取甲10枚，觀察甲板顏色形態(tài)變化，進(jìn)行20％NaOH加熱溶甲，比較不同菌之間、不同培養(yǎng)基之間甲板被侵犯的程度差異。 第二部分： 建立真菌透甲模型。將制作成功的透甲模型隨機(jī)分為短帚霉組、紅色毛癬菌組、短帚霉-紅色毛癬菌混合組，每組13個(gè)。觀察從甲板的腹

4、側(cè)面滴加各組對(duì)應(yīng)的菌懸液到甲板背側(cè)面形成菌落的透甲時(shí)間。比較各組的透甲時(shí)間是否有差異。運(yùn)用掃描電鏡觀察透甲模型中甲板受侵犯的情況。 結(jié)果： 第一部分： 1.在固體沙堡培養(yǎng)基上，既成菌落的短帚霉和紅色毛癬菌侵犯甲板的程度和速度相似，比白念珠菌侵犯甲板的程度重，速度快。 2.插入固體沙堡培養(yǎng)基菌落中的甲板，除了紅色毛癬菌、深紅酵母組甲板有部分發(fā)生紅色變，短帚霉、串珠鐮刀菌、繩狀青霉、煙曲霉、白念珠菌的甲板都發(fā)

5、生白色點(diǎn)狀變，不能拭去。 3.用NaOH加熱溶甲法分析接種第10天甲板內(nèi)菌負(fù)荷，紅色毛癬菌、短帚霉、串珠鐮刀菌、繩狀青霉兩兩之間在固體沙堡培養(yǎng)基上侵犯甲板的程度無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各種絲狀真菌侵犯體外甲板的能力比酵母菌強(qiáng)(P<0.05)。白念珠菌犯體外甲板的能力比深紅酵母強(qiáng)(P<0.05)。 4.同一種絲狀真菌在固體沙堡培養(yǎng)基上對(duì)甲板的侵襲力，遠(yuǎn)比在液體沙堡培養(yǎng)基或生理鹽水中強(qiáng)(P<0.05)。 第

6、二部分： 在本實(shí)驗(yàn)中，紅色毛癬菌的透甲時(shí)間為9.46±1.89天，短帚霉的透甲時(shí)間為2.62±0.96天，混合組中短帚霉的透甲時(shí)間為2.54±0.78天。短帚霉比紅色毛癬菌生長(zhǎng)快，先穿透甲板，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。短帚霉單獨(dú)培養(yǎng)組與短帚霉-紅色毛癬菌混合組的透甲時(shí)間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。運(yùn)用掃描電鏡，可見(jiàn)穿越甲板的菌絲。 結(jié)論： 1．在固體沙堡培養(yǎng)基條件下，短帚霉、串珠鐮刀菌、繩狀青霉、煙曲霉

7、、白念珠菌對(duì)甲板均具有直接的侵襲性。深紅酵母是否具有侵襲性有待商榷。 2．比較7種真菌在3種培養(yǎng)基中甲板受侵犯情況，發(fā)現(xiàn)真菌穿透甲的能力和真菌形成菌絲的能力成正比，和真菌與甲板接觸的穩(wěn)定性成正比。 3．在固體沙堡培養(yǎng)基上，既成菌落的短帚霉和紅色毛癬菌侵犯甲板的程度和進(jìn)度相似，都比白念珠菌侵犯甲板的程度重，進(jìn)度快。而在真菌透甲模型中，制備成菌懸液的短帚霉比紅色毛癬菌生長(zhǎng)快，先穿透甲板。 4．將紅色毛癬菌的菌懸液與短