1、益生菌可調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡和免疫功能，從而改善動物生產(chǎn)性能。芽孢桿菌制劑因其較好的抗逆性而得到廣泛應用。本課題組前期已篩選獲得一株可顯著促進仔豬生長和改善腸粘膜免疫功能的解淀粉芽孢桿菌SC06(BaSC06)。本論文研究了BaSC06對小鼠抗沙門氏菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium，ST)感染和腸道巨噬細胞極化的影響及機理，旨在探明BaSC06對體內(nèi)巨噬細胞極化的調(diào)控及其與抗ST感染的

2、相關性主要研究內(nèi)容和結果如下:
　?。ㄒ唬╋曃笲aSC06對小鼠抗ST感染能力和腸道巨噬細胞極化的影響
　　雄性C57BL/6小鼠隨機分為四組，分別為Control組，BaSC06組，ST組和BaSC06+ST組。Control組和ST組小鼠飼喂普通飼糧，BaSC06組和BaSC06+ST組小鼠飼喂含有BaSC06的飼糧，連續(xù)飼喂8周。然后ST組和BaSC06+ST組小鼠灌服ST，3天后處死取樣。研究結果表明:(1)飼喂Ba

3、SC06顯著緩解由ST引起的小鼠體重下降、盲腸萎縮、回盲腸和結腸粘膜損傷及腸道炎癥;(2)飼喂BaSC06可顯著降低ST在小鼠腸系膜淋巴結(Mesenteric lymph node，MLN)和脾臟中的移位，ST感染前后，BaSC06對派伊爾結(Peyer's patches，PP)、MLN和脾臟中的CD4∶CD8比值均無顯著影響，表明BaSC06不能調(diào)節(jié)T細胞分化。飼喂BaSC06對小鼠血清細胞因子IL-1β、IL-4、、IL-12、

4、IL-10和IL-13無顯著影響，顯著增加IFN-γ含量;但可顯著降低由ST感染引起的促炎因子IL-1β和IL-12的增加，促進抑炎因子IL-10的表達。以上結果表明，飼喂BaSC06可有效降低ST感染引起的系統(tǒng)性損傷和炎癥反應;(3)飼喂BaSC06可明顯降低ST感染引起的盲腸巨噬細胞浸潤，同時誘導盲腸巨噬細胞向M1型和M2型極化，顯著增加ST感染小鼠MLN中M1和M2型巨噬細胞數(shù)量。以上結果提示，飼喂BaSC06可誘導腸道巨噬細胞向

5、M1型和M2型極化，有效緩解ST引起的小鼠腸道和全身感染。
　?。ǘ〣aSC06對巨噬細胞極化的影響
　　以BaSC06處理小鼠巨噬細胞系Raw264.7，結果發(fā)現(xiàn):(1)BaSC06與巨噬細胞共培養(yǎng)6h后顯著增強巨噬細胞的吞噬殺菌功能;(2)基因表達和Western Blot檢測表明BaSC06促進巨噬細胞向M1型極化;(3)流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)ST感染可促進巨噬細胞向M2型極化，BaSC06與ST共同作用24h后促進巨噬

6、細胞M1型極化，抑制M2型極化。
　　腹腔注射BaSC06（106CFU/只）或ST（105CFU/只），12h后麻醉處死小鼠并分離腹腔巨噬細胞進行流式細胞術分析，結果表明:(1)ST誘導腹腔巨噬細胞向M2型極化，抑制M1型極化。BaSC06可誘導腹腔巨噬細胞向M1型極化，對M2型極化無顯著影響;(2)過繼回輸經(jīng)BaSC06誘導的原代巨噬細胞顯著降低了脾臟的ST載菌量。以上結果表明BaSC06通過誘導巨噬細胞M1型極化增強其對ST

7、的殺菌活性。
　　通過構建抗生素小鼠模型可排除腸道菌群對結果的干擾，直接驗證BaSC06對腸道巨噬細胞的極化的影響。每只小鼠灌喂20mg鏈霉素后灌服ST和BaSC06。結果表明，與抗生素處理組相比，ST感染誘導腸道巨噬細胞向M2型極化，對M1型巨噬細胞無顯著影響，BaSC06促進腸道巨噬細胞向M1型極化，抑制ST誘導的M2型極化。以上結果表明，ST感染誘導巨噬細胞向M2型極化，BaSC06可直接誘導巨噬細胞向M1型極化，逆轉(zhuǎn)ST誘

8、導的M2型極化，促進細胞和機體清除ST。
　　（三）解淀粉芽孢桿菌BaSC06調(diào)節(jié)的腸遒菌群對沙門氏菌感染及巨噬細胞極化的影響
　　飼喂BaSC06同時誘導小鼠腸道內(nèi)巨噬細胞向M1型和M2型極化，BaSC06可直接誘導巨噬細胞向M1型極化，鑒于益生菌可調(diào)節(jié)腸道菌群發(fā)揮其益生作用，故推測BaSC06可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群促進巨噬細胞向M2型極化。小鼠腸道菌群的分析結果表明:(1)飼喂BaSC06對健康小鼠的腸道菌群多樣性無顯著影

9、響，但BaSC06可顯著緩解ST感染導致的菌群多樣性的降低。ST感染可降低疣微菌門（Verrucomicrobia）的比例，增加擬桿菌門(Bacterodetes)的相對豐度;而飼喂BaSC06顯著升高疣微菌門（Verrucomicrobia）的比例，降低擬桿菌門(Bacterodetes)的相對豐度，表明BaSC06可緩解ST引起的菌群失衡。
　　將Control組和飼喂BaSC06組小鼠的糞便菌群移植給抗生素處理后的小鼠，檢測

10、盲腸炎癥和巨噬細胞極化，結果表明:(1)移植BaSC06組小鼠的糞便菌群后能夠緩解ST引起的盲腸中性粒細胞浸潤，緩解盲腸炎癥;(2)BaSC06組小鼠糞便菌群能夠促進盲腸巨噬細胞向M2型極化。以上結果表明BaSC06可通過調(diào)節(jié)腸道菌群促進巨噬細胞向M2型極化，維持腸道穩(wěn)態(tài)，緩解ST感染引起的炎癥反應。
　　綜上所述，飼喂BaSC06可直接促進巨噬細胞M1型極化，增加其對ST的殺傷功能，同時BaSC06調(diào)節(jié)的腸道菌群能夠促進巨噬細胞