1、體細胞胚胎發(fā)生是林木無性系及新品種規(guī)?；敝车闹饕侄危彩茄芯恐参锛毎苄缘睦硐肽Ｊ襟w系，在林木的品種改良、規(guī)?；敝场⒎N質保存及遺傳轉化等諸多領域均有重要科學意義和應用價值。然而，落葉松胚性組織因長期繼代培養(yǎng)存在胚性組織轉變?yōu)榉桥咝越M織的現象，且存在原胚發(fā)育質量不高、發(fā)生數量低、難以同步化等問題。因此，從分子水平研究體細胞胚發(fā)生發(fā)育表達調控機制，揭示體細胞胚發(fā)生發(fā)育機理，可為建立高效穩(wěn)定的體細胞胚發(fā)生體系奠定基礎。本研究：（1）以

2、日本落葉松胚性細胞系638為實驗材料，利用SMART技術構建了落葉松體細胞胚全長cDNA文庫；（2）通過454 GS FLX Titanium高通量測序平臺，獲得了日本落葉松體細胞胚原胚團時期轉錄組信息，對所得轉錄組數據進行了相關生物信息學分析及注釋。主要結果如下：
　　1.文庫構建與分析研究表明，所建初始文庫滴度為2.25×106pfu/mL，重組率為95.13％，擴增文庫滴度為2.65×109pfu/mL，插入片段長度主要分布

3、在0.5～2kb之間，平均長度為850bp；說明所構建文庫質量高、代表性好，能用于目的基因分離篩選及表達。
　　2.從初始文庫中隨機挑選16個克隆進行測序，成功測序15個，經去除低質量序列，拼接獲得13個unigenes，包括2個contigs和11個singletons，其中3個unigenes有已知功能，2個unigenes具推測功能，2個unigenes功能未知，6個unigenes在蛋白質數據庫中無同源序列，結果表明，能從

4、構建的文庫中分離得到低豐度表達基因或者落葉松體細胞胚特有的新基因。
　　3.對原胚團時期落葉松胚性細胞系638進行轉錄組研究顯示：
　?。?）1/2的454測序共獲得591759條原始reads，經重頭拼接后獲得32321個contigs和38606條singletons，即70927條ESTs，去掉小于100bp的EST序列，余65115條高質量ESTs。表明，454高通量測序技術是目前大規(guī)模獲得ESTs序列的有效方式。<

5、br>　?。?）綜合Uniprot及CDD比對結果，共31077條EST序列獲得注釋。在這些獲得注釋序列中，6569條獲得了GO分類信息；COG分析表明可被劃分為22類。KEGG分析結果表明6281條ESTs可歸為291個KEGG途徑。搜尋EST序列的潛在SSR，得到1121個SSR。
　?。?）與擬南芥（Arabidopsis thaliana）、水稻（Oryza sativa）、毛果楊（Populus trichocarpa）

6、及小立碗蘚（Physcomitrella patens）蛋白質數據庫的BLASTX比對結果表明，日本落葉松（Larix leptolepis）和毛果楊有更多的同源序列。
　?。?）與PGI9.0及SGI5.0 EST并集數據庫、小立碗蘚Unigene、擬南芥及水稻Unigene并集、楊樹EST數據庫的TBLASTX比對表明，裸子植物和被子植物的基因信息有較大的差異，裸子植物的基因序列信息并不能完全從被子植物中得到注釋。