1、嚴(yán)重創(chuàng)傷失血性休克與多臟器功能衰竭的關(guān)系十分密切，肝臟在多臟器功能衰竭的發(fā)生中起著重要作用。創(chuàng)傷性休克后，肝細(xì)胞的損害和功能改變，必然導(dǎo)致機(jī)體對(duì)應(yīng)激調(diào)節(jié)功能的改變。因此，研究創(chuàng)傷休克后肝功能不全的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。如果能夠在肝功能損害出現(xiàn)之前進(jìn)行及時(shí)、有效、正確的調(diào)控，就可以在很大程度上防止嚴(yán)重創(chuàng)傷后肝功能不全、甚至全身繼發(fā)性損害和嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。 GC(Glucocorticoid，GC)效應(yīng)是機(jī)體最為重要的應(yīng)激反應(yīng)之一

2、，GC與其GR(Glucocorticoidreceptor,GR)結(jié)合后，可引起廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如抗炎、抗過(guò)敏、抗休克。GR是GC效應(yīng)發(fā)揮的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重創(chuàng)傷可以引起機(jī)體GR的表達(dá)和功能發(fā)生改變；HSP在嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體組織器官、細(xì)胞的抗損傷方面發(fā)揮重要作用，HSP(Heatshockprotein，HSP)是GR的一種重要的伴侶蛋白，影響著GR活性和功能；NF-κB(Nuclearfactor-kappaB，NF-κB)可

3、誘導(dǎo)多種與免疫和炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子和其它相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)而對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷后組織器官造成損害。在免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)控中，GR和NF-κB是一對(duì)功能上起著完全相反作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，GR可抑制NF-κB誘導(dǎo)的免疫和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)揮免疫抑制和抗炎功能。然而，在嚴(yán)重創(chuàng)傷休克時(shí)，GR、HSP、NF-κB在肝組織中的變化，以及與創(chuàng)傷后肝臟繼發(fā)性損害與抗損害的關(guān)系，它們是否參與了創(chuàng)傷性休克的發(fā)生、發(fā)展，在創(chuàng)傷休克后肝功能不全發(fā)病機(jī)理中

4、的作用如何，以及相互關(guān)系方面的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雙側(cè)股骨骨折伴失血性休克實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，從肝組織細(xì)胞受體水平，觀察GR、HSP70及NF-κB的變化，并以阻斷GR、抑制NF-κB以及地塞米松對(duì)其影響為切入點(diǎn)，深入研究了它們之間的相互作用，初步闡明嚴(yán)重創(chuàng)傷休克時(shí)，GR與NF-κB在肝組織細(xì)胞抗損傷與損傷中的作用及其機(jī)制，為嚴(yán)重創(chuàng)傷休克后肝功能不全的發(fā)生機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 主要實(shí)驗(yàn)方法： 1.建立了大鼠雙側(cè)股骨骨折伴失血性

5、休克致嚴(yán)重創(chuàng)傷性休克模型；建立了阻斷GR致嚴(yán)重創(chuàng)傷休克模型；建立了抑制NF-κB致嚴(yán)重創(chuàng)傷休克模型。 2.通過(guò)免疫印跡(Westernblot)方法檢測(cè)了創(chuàng)傷休克后肝組織胞漿GR、HSP70、I-κB的蛋白含量。 3.通過(guò)凝膠遷移試驗(yàn)(EMSA)方法檢測(cè)了創(chuàng)傷休克后肝細(xì)胞核NF-κB的結(jié)合活性。 4.通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)檢測(cè)創(chuàng)傷休克后血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的變化。 5.通過(guò)HE染色

6、觀察創(chuàng)傷休克后光鏡下肝組織的病理變化。 6.通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)創(chuàng)傷休克后血清ALT、TB及白蛋白的變化。 7.通過(guò)20只大鼠計(jì)算創(chuàng)傷休克后動(dòng)物死亡率。 主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果： 1.在該模型下，進(jìn)行了GR在肝組織中的表達(dá)研究，發(fā)現(xiàn)隨著休克的發(fā)生，GR呈進(jìn)行性下降，且休克時(shí)間越長(zhǎng)，其在肝臟中的表達(dá)越低，傷后8h稍有恢復(fù)，但仍顯著低于正常對(duì)照。提示GR與休克的發(fā)生密切相關(guān)。研究了阻斷GR后再致創(chuàng)傷性休克，發(fā)

7、現(xiàn)隨著創(chuàng)傷后休克時(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟淤血、水腫越重，炎性細(xì)胞出現(xiàn)更早，細(xì)胞因子TNF-α、IL-6增多，肝臟繼發(fā)性損害更加明顯，在休克后4h即可見(jiàn)肝血竇內(nèi)出現(xiàn)炎性細(xì)胞。休克時(shí)間越長(zhǎng)，上述改變?cè)矫黠@。 2.在該模型下，進(jìn)行了HSP70在肝組織中的表達(dá)研究，發(fā)現(xiàn)隨著休克的發(fā)生，HSP70逐漸增多，且休克時(shí)間越長(zhǎng)，其在肝臟中的表達(dá)越多。提示HSP70參與了創(chuàng)傷性休克肝臟抗損害機(jī)制的啟動(dòng)。研究了阻斷GR后再致創(chuàng)傷性休克，發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白70在

8、傷后各個(gè)時(shí)相點(diǎn)表達(dá)更強(qiáng)，而肝臟無(wú)論從功能，還是形態(tài)上，其損害更加明顯。3.在該模型下，對(duì)NF-κB及IκB進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)NF-κB在創(chuàng)傷性休克傷后，在肝組織中迅速表達(dá)，傷后6h達(dá)到峰值。IκB迅速下降，傷后6h下降至比較低的水平。血清中細(xì)胞因子TNF-α、IL-6明顯增多，肝臟出現(xiàn)明顯的繼發(fā)性損害。提示NF-κB在肝臟免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用，NF-κB激活可導(dǎo)致創(chuàng)傷休克后繼發(fā)性肝損害的發(fā)生。研究了阻斷GR后再致創(chuàng)傷性休克，

9、NF-κB在肝組織中的活性在傷后各個(gè)時(shí)相點(diǎn)的表達(dá)均較阻斷前有明顯增高，傷后8h仍持續(xù)在相當(dāng)高的水平；IκB在肝組織中的表達(dá)則迅速下降。 4.研究了抑制NF-κB后再致創(chuàng)傷性休克，GR在傷后各個(gè)時(shí)相點(diǎn)在肝組織中的表達(dá)，均有所恢復(fù)。抑制NF-κB可顯著提高GR在肝組織中的蛋白含量。抑制NF-κB可下調(diào)HSP70在肝組織中的表達(dá)，血清中細(xì)胞因子TNF-α、IL-6下降，肝臟無(wú)論從形態(tài)，還是功能上，其損害都得到了明顯緩解。 5.

10、研究了腹腔注射地塞米松，小劑量地塞米松對(duì)HSP70、NF-κB及IκB無(wú)明顯影響。但大劑量地塞米松可增強(qiáng)HSP70在肝組織中的表達(dá)，明顯抑制NF-κB的活性，并且可增強(qiáng)IκB在肝組織中的表達(dá)。細(xì)胞因子TNF-α、IL-6明顯下降。肝臟功能損害程度明顯減輕，組織損傷也明顯好轉(zhuǎn)。 主要結(jié)論： 1.GR不足在創(chuàng)傷性休克后肝臟繼發(fā)性損害發(fā)生的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，正常功能狀態(tài)下的GR對(duì)肝組織細(xì)胞抵抗應(yīng)激損害具有保護(hù)作用。

11、 2.HSP70在創(chuàng)傷休克后參與了肝臟抗損傷機(jī)制的啟動(dòng)，其持續(xù)過(guò)高可影響GR的活性及其功能。 3.NF-κB在肝臟免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用，NF-κB激活導(dǎo)致了創(chuàng)傷休克后繼發(fā)性肝損害的發(fā)生。 4.嚴(yán)重創(chuàng)傷休克后GR阻斷可促進(jìn)HSP70在肝組織中的持續(xù)表達(dá)，但肝臟無(wú)論從功能，還是形態(tài)上，其損害更加明顯。表明GR與HSP70在嚴(yán)重創(chuàng)傷休克后肝臟損傷與抗損傷過(guò)程中存在某種功能聯(lián)系。 5.在創(chuàng)傷性休克應(yīng)激情況下

12、，GR阻斷可增強(qiáng)NF-κB的活性表達(dá)，并且可抑制IκB的表達(dá)，從而加重繼發(fā)性肝損害的發(fā)生。說(shuō)明正常功能狀態(tài)的GR可抑制NF-κB誘導(dǎo)的免疫和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)揮免疫抑制和抗炎功能，阻抑肝功能不全的發(fā)生。 6.抑制NF-κB可顯著提高GR在肝組織中的蛋白含量。同時(shí)下調(diào)HSP70在肝組織中的表達(dá)，肝臟無(wú)論從形態(tài)，還是功能上，其損害都得到了明顯緩解，表明在創(chuàng)傷性休克過(guò)程中抑制NF-κB，可明顯減輕肝組織細(xì)胞的損害，對(duì)肝臟具有保護(hù)作