亞低溫對(duì)腦缺氧缺血新生大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、[目的]亞低溫(mild hypothermia)是治療新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxicischemic brain damage,HIBD)的一種有效的方法,可通過(guò)降低腦細(xì)胞的能量代謝、減少細(xì)胞毒性產(chǎn)物的積聚、對(duì)抗細(xì)胞壞死等途徑發(fā)揮腦保護(hù)作用。星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte,AST)是腦細(xì)胞的重要組成部分,在缺氧缺血(hypoxic-ischemia,HI)后的腦損傷與修復(fù)過(guò)程中扮演重要角色。既往研究重點(diǎn)多集中于亞低溫對(duì)神經(jīng)元

2、的保護(hù)作用,對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞影響的研究極少,是否存在保護(hù)作用及其機(jī)制并不明了。本研究采用在體7日齡新生大鼠腦缺氧缺血模型及體外培養(yǎng)海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,觀察亞低溫對(duì)缺氧缺血性腦損傷后新生大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響,探討亞低溫對(duì)未成熟腦缺氧缺血性損傷的保護(hù)機(jī)制。
  [方法](一)在體實(shí)驗(yàn):首先制備大鼠腦缺氧缺血模型,7日齡大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后置于含8

3、%氧氣的氮氧混合氣的37℃缺氧箱中缺氧2 h。對(duì)照組大鼠僅實(shí)施假手術(shù),不進(jìn)行缺氧缺血。術(shù)后動(dòng)物隨機(jī)分為常溫處理組、亞低溫治療組、常溫對(duì)照組、亞低溫對(duì)照組;分別在HI后24 h、72 h和7天制備腦片,通過(guò)免疫組化計(jì)數(shù)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞來(lái)評(píng)價(jià)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的變化;通過(guò)免疫組化雙標(biāo)計(jì)數(shù)GFAP與caspase-3雙陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡變化。(二)體

4、外實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)1日齡大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞,采用氧糖剝奪(OGD)方法以模擬在體缺氧缺血損傷過(guò)程,采用CCK-8、Tunel及DAPI染色觀察亞低溫處理后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡變化。
  [結(jié)果]大鼠海馬區(qū)域GFAP染色結(jié)果顯示,HI后72 h和7天亞低溫治療組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞低于常溫組,同一時(shí)間點(diǎn)兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HI后72 h常溫處理組海馬部位84.5%GFAP陽(yáng)性細(xì)胞發(fā)生Caspase-3共表達(dá),而亞低溫治

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