1、白藜蘆醇甙(Polydatin)即3，4'，5-三羥基芪-3-β-葡萄糖苷(3，4'，5-trihydroxystibene-3-β-mono-D-glucoside)，為二苯乙烯類化合物，具有較強的生物活性。Polydatin是蓼科蓼屬草本植物虎杖等的主要活性成分，在植物中分布廣，含量較高，目前至少在70余種植物中發(fā)現(xiàn)了Polydatin。實驗結果表明，Polydatin可抑制血小板聚集，降低白細胞對血管內皮的粘附性，改善休克微循環(huán)，

2、抑制脂質過氧化，減輕氧自由基損傷，對缺糖缺氧及氯丙嗪損傷的心肌細胞有保護作用。在大鼠腦缺血/再灌注模型，Polydatin可不同程度地降低腦組織的過氧化物脂質含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性、降低腦含水量，減輕自由基反應對腦組織的損害，對缺血腦組織有保護作用，并呈明顯的劑量依賴性。此外，有研究顯示Polydatin對家兔腸、肺、肝和腎損傷均有保護作用，其保護作用與減少腫瘤壞死因子和溶酶體酶的釋放有關

3、。然而，有關Polydatin對心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷的影響，未見報道。 本研究旨在通過生理學、藥理學、免疫組化、流式細胞和分子生物學等方法探討Polydatin的心臟保護作用及其作用機制。研究分為四部分：(1)Polydatin對大鼠缺血/再灌注心臟的保護作用：利用Langendorff離體心臟灌注系統(tǒng)，建立離體大鼠心臟缺血/再灌注模型，觀察Polydatin對大鼠心臟缺血/再

4、灌注損傷的影響，并探討NO在其中所起的作用。(2)ATP敏感性鉀通道和線粒體通透轉換孔在Polydatin心臟保護中的作用：在大鼠離體灌流心臟，通過藥理學方法探討ATP敏感性鉀通道(KATP)和線粒體通透轉換孔(MPTP)在Polydatin心臟保護中的作用。(3)Polydatin對大鼠心肌細胞凋亡的影響：利用DNA瓊脂糖凝膠電泳、TUNEL染色和流式細胞學等方法，觀察Polydatin對大鼠心臟缺血/再灌注誘導的細胞凋亡的影響。(4

5、)Polydatin的抗缺血/再灌注心律失常作用：采用在體大鼠心臟缺血/再灌注損傷模型觀察Polydatin對在體心臟缺血/再灌注心律失常的影響，并探討其電生理學基礎。 Ⅰ白藜蘆醇甙對大鼠缺血/再灌注心臟的保護作用 目的：探討Polydatin對大鼠離體缺血/再灌注心臟的保護作用及其NO作用機制。 方法：雄性SD大鼠隨機分為兩組：對照組和Polydatin組。利用Langendorff灌注技術，使心臟缺血30分鐘

6、再灌注60分鐘，建立大鼠離體心臟全心缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，觀察Polydatin對缺血/再灌注后心臟收縮功能、心肌超微結構、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，一氧化氮(NO)含量以及一氧化氮合酶(NOS)活性的影響。 結果： (1)Polydatin組大鼠缺血/再灌注后的心臟左室發(fā)展壓(LVDP)、左室壓力上升和下降最大變化速率(+LVdp/dtm

7、ax)的恢復百分比分別為43.3±8.7％，42.9±14.9％和42.4±21.3％，明顯高于對照組的22.5±11.2％，23.1±17.3％和24.1±8.5％(P<0.05～0.01)。 (2)Polydatin能明顯減輕缺血/再灌注后心肌超微結構的損傷。 (3)Polydatin組大鼠缺血/再灌注后心肌SOD活性為965±77U/gprotein，明顯高于對照組的788±137 U/g protein，而MDA

8、含量則由對照的2.79±0.37μmol/g protein降低為2.15±0.50μmol/g protein(P<0.05)。 (4)Polydatin組大鼠心肌缺血/再灌注后NO含量為3.58±1.47μmol/gprotein，明顯高于對照組的2.08±0.71μmol/g protein(P<0.05)。Polydatin組大鼠NOS及cNOS活性分別為1.23±0.34 KU/g protein和0.76±0.35

9、KU/gprotein，明顯高于對照組的0.85±0.16 KU/g protein和0.38±0.19 KU/gprotein(P<0.05)。 (5)NO合酶抑制劑L-NAME能夠拮抗Polydatin對缺血/再灌注心臟的保護作用。 小結：Polydatin具有明顯的抗心肌缺血/再灌注損傷作用，此作用主要cNOS產(chǎn)生的NO增加所介導。 ⅡATP敏感性鉀通道和線粒體通透轉換孔在白藜蘆醇甙心臟保護中的作用

10、 目的：探討ATP敏感性鉀通道(KATP)和線粒體通透性轉換孔(MPTP)在Polydatin心臟保護中的作用。 方法：雄性SD大鼠隨機分為七組：對照組、Polydatin 25μmol/L組、Polydatin 50μmol/L組、Polydatin 75μmol/L組、格列本脲(Glibenclamide)組、5-羥基癸酸(5-hydroxydecanoate，5-HD)組、蒼術苷(Atractyloside)組。利用Lan

11、gendom灌注技術，在離體大鼠心臟觀察不同藥物對缺血/再灌注后心功能和心肌梗死面積的影響。 結果： (1)與對照組相比，Polydatin(25、50、75μmol/L)可濃度依賴地改善大鼠缺血/再灌注心功能的恢復。再灌注60分鐘后，Polydatin(50μmol/L)組心臟左室發(fā)展壓(LVDP)、左室壓力上升和下降最大變化速率(±LVdp/dtmax)和冠脈流量(CF)分別為(41.7±9.2)mmHg，(1069

12、.9±77.0)mmHg/s，(-992.8±294.5)mmHg/s和(4.1±1.1)ml/min，明顯高于對照組的(20.8±12.0)mmHg，(598.3±219.5)mmHg/s，(-506.9±180.5)mmHg/s和(2.4±0.4)ml/min(P<0.05或0.01)；而左室舒張末壓(LVEDP)為61.4±3.2mmHg，明顯低于對照組的76.2±6.0 mmHg(P<0.01)。 (2)預先應用非特異性

13、ATP敏感性鉀通道(KATP)阻斷劑格列本脲可完全消除Polydatin(50μmol/L)對缺血/再灌注心臟的保護作用；此外，特異性線粒體KATP阻斷劑5-HD能夠大部分阻斷Polydatin(50μmol/L)心功能改善作用。 (3)再灌注初期應用線粒體通透性轉換孔(MPTP)開放劑atractyloside可完全消除Polydatin(50μmol/L)的保護作用。 (4)Polydatin(50μmol/L)明顯

14、限制缺血/再灌注后心肌梗死面積，此作用可被格列本脲、5-HD和atractyloside所阻斷。 小結：Polydatin具有明顯的抗心肌缺血/再灌注損傷作用；此作用與KATP，尤其是線粒體KATP開放以及抑制MPTP開放有關。 Ⅲ白藜蘆醇甙減少缺血/再灌注誘導的心肌細胞凋亡 目的：探討Polydatin對大鼠缺血/再灌注心肌細胞凋亡的影響及其相關機制。 方法：雄性SD大鼠隨機分為三組：對照組，缺血/再灌

15、注(I/R)損傷組，Polydatin組。利用Langendorff灌注技術，使心臟缺血30分鐘再灌注60分鐘，建立離體大鼠心臟缺血/再灌注(I/R)模型。觀測缺血/再灌注后心肌細胞凋亡的變化。通過流式細胞技術，測定心肌Bcl-2和Bax蛋白的表達。 小結：Polydatin可減少缺血/再灌注誘導的大鼠心肌細胞凋亡，可能通過增加Bcl-2蛋白表達，減少Bax蛋白表達所實現(xiàn)。 Ⅳ白藜蘆醇甙的抗心律失常作用及其電生理學機制

16、 目的：探討Polydatin的抗心律失常作用及其電生理學機制。 方法：雄性SD大鼠隨機分為兩組：對照組，Polydatin組；利用冠脈結扎/放松方法，建立在體心臟缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，觀察Polydatin對缺血/再灌注心律失常的影響。并應用經(jīng)典玻璃微電極技術記錄心室乳頭肌動作電位。 小結：Polydatin具有明顯的抗心肌缺血/再灌注心律失常作用；Polyda

17、tin部分通過KATP，濃度依賴性地縮短動作電位時程，并抑制部分去極化乳頭肌動作電位，此作用可能是Polydatin抗心律失常的電生理學機制之一。 結論： 1.白藜蘆醇甙具有明顯的抗心肌缺血/再灌注損傷作用，此作用可由cNOS產(chǎn)生的NO增加所介導。 2.KATP，尤其是線粒體KATP開放以及MPTP開放的抑制可能參與白藜蘆醇甙的心臟保護作用。 3.白藜蘆醇甙可減少缺血/再灌注誘導的大鼠心肌細胞凋亡，可能通