1、乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，目前已是女性最常見的惡性腫瘤，是女性惡性腫瘤死亡原因的第二位。目前新輔助化療已是治療局部晚期乳腺癌患者的常規(guī)手段之一，其療效是患者局部復發(fā)、遠處轉移和總體生存率的獨立預后因子，但目前新輔助化療的患者有效率最高僅達到800％，因此找到預測乳腺癌化療敏感性的生物學指標異常重要。 在人類癌癥的發(fā)生、發(fā)展和預后的研究中，調控性非編碼微小RNA（microRNA，miRNA）的作用倍受人們關注。MiRNA有

2、組織特異性、分化和發(fā)育的時間性以及表達特異性，可以發(fā)揮抑癌基因或類似癌基因的作用。與乳腺癌相關的microRNA中，let—7家族倍受關注。let—7最早在線蟲中發(fā)現，它能調控細胞的分化和增殖的時序。let—7在乳腺癌組織中相對低表達，它能在轉錄后水平抑制RAS和HMGA2蛋白的表達，因此被認為是抑癌的“miRNA”。最近的文獻顯示let—7與腫瘤化療耐藥相關，let—7低表達的卵巢癌細胞和卵巢癌細胞系對鉑類耐藥。因此，深入研究let—

3、7與乳腺癌化療耐藥之間的關系，有助于研究乳腺癌化療敏感的預測因子，理解乳腺癌化療耐藥的機制并為乳腺癌的生物靶向治療提供新的方向。 第一章 let—7 microRNA表達水平與乳腺癌化療耐藥關系的臨床研究 目的： 研究接受含表阿霉素方案新輔助化療的患者化療前乳腺癌組織中l(wèi)et—7micorRNA的表達水平與其化療敏感性之間的關系。 方法： 收集接受含表阿霉素方案新輔助化療的患者化療前的新鮮乳腺癌組

4、織和石蠟包埋的乳腺癌組織，分別用real—time RT—PCR和原位雜交法檢測乳腺癌組織中l(wèi)et—7 microRNA的表達水平；用乳腺B超測量化療前后患者乳腺癌的大小以評價化療的療效。通過統(tǒng)計學分析，研究患者的乳腺癌組織中l(wèi)et—7 microRNA表達水平與患者化療敏感性之間的關系。 結果： 共收集23例接受新輔助化療患者化療前的新鮮乳腺癌組織，化療耐藥組（cSD+cPD）為8例，化療敏感組（cCR+cPR）為15

5、例，Real—time RT—PCR檢測let—7表達水平顯示，化療耐藥組let—7表達水平明顯低于化療敏感組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。收集33例接受新輔助化療患者的石蠟包埋的乳腺癌組織，化療耐藥組（cSD+cPD）為9例，化療敏感組（cCR+cPR）為24例，原位雜交檢測let—7表達水平顯示，化療耐藥組let—7表達水平明顯低于化療敏感組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。 結論： let—7 micro

6、NA在對表阿霉素耐藥的乳腺癌組織中相對低表達，可能作為預測乳腺癌對表阿霉素敏感性的潛在生物學因子。 第二章提高let—7的表達水平可以增加乳腺癌細胞對表阿霉素的敏感性 目的： 采用microRNA mimics轉染技術提高SK—3rd球囊細胞中l(wèi)et—7 microRNA的表達，研究提高乳腺癌細胞系SK—3rd球囊細胞中l(wèi)et—7 microRNA的表達水平能否增加其對表阿霉素的敏感性。 方法：

7、以let—7a mimics轉染let—7 microRNA幾乎不表達的SK—3rd球囊細胞，采用real—time RT—PCR方法檢測轉染前后的SK—3rd球囊細胞中l(wèi)et—7的表達水平的變化、western blot方法檢測let—7靶蛋白H—RAS、HMGA2的表達水平的變化以驗證let—7能否成功轉染SK—3rd球囊細胞并在細胞內發(fā)揮作用。采用MTT法和流式細胞術，檢測轉染let—7a mimics前后SK—3rd球囊細胞對表

8、阿霉素敏感性的變化。 結果： 經過let—7a mimics轉染后，SK—3rd球囊細胞中l(wèi)et—7表達水平提高，細胞中l(wèi)et—7的靶蛋白H—RAS和HMGA2的表達水平明顯降低，表明let—7a mimics能夠成功轉染SK—3rd球囊細胞并在細胞內發(fā)揮作用。相對于陰性對照組，表阿霉素對let—7a mimics轉染后的SK—3rd球囊細胞細胞活力抑制作用增強，表阿霉素對let—7a mimics轉染后的SK—3rd球