肺結核患者外周血中樹突狀細胞亞群的變化及結核桿菌耐熱性抗原對樹突狀細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:已有研究證明,人體內樹突狀細胞(DCs)亞群,在許多疾病包括結核病(TB)中都有不同程度的改變,但在不同分期肺結核(PTB)患者體內DCs亞群的變化有何不同尚不清楚。已有報導結核分枝桿菌對DCs的功能有抑制作用,從結核桿菌H37Ra株中提取的結核桿菌耐熱性抗原(Mtb-HAg)是一種能優(yōu)勢誘導γδ-T細胞活化的小分子多肽,但對DCs的成熟和功能有何影響也尚未報道。
  目的:研究不同分期肺結核患者外周血來源的DCs亞群即

2、髓樣樹突狀細胞(myeloid dendritic cells, MDC)和淋巴樣樹突狀細胞(plasmacytoid dendritic cell, PDC)的變化,及Mtb-HAg在體外對人外周血單核細胞來源的DCs誘導成熟的影響。
  方法:
  1.DCs亞群測定方法:采集32例健康者(HD)和56例PTB患者外周靜脈抗凝全血,用四色熒光抗體染色后在流式細胞儀檢測和分析 DCs亞群, MDC(Lin-HLA-DR+C

3、D11c+),和 PDC(Line-HLA-DR+CD123+),根據診治情況又將PTB患者分為初治組和復治組。
  2.DCs培養(yǎng)方法:從健康人外周血,分離獲取外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)后,用貼壁法獲得單核細胞,加GM-CS和IL-4培養(yǎng)7天,再用LPS或Mtb-HAg誘導再培養(yǎng)2 d。
  3.培養(yǎng)DCs的形態(tài)學觀察:取培養(yǎng)第2 d的細胞及第9 d

4、經Mtb-HAg誘導的DCs,用抗CD14-FITC、抗CD11c-APC染色后在熒光顯微鏡下觀察細胞表面標志的表達。4.培養(yǎng)DCs的表型測定:培養(yǎng)的DCs用熒光抗體標記后,用流式細胞儀檢測細胞表面共刺激分子CD80,CD86和HLA-DR及DCs成熟的標志CD83,以及MDC表面標志CD11c、PDC的表面標志CD123的表達。
  5.混合淋巴細胞反應:CFSE標記的純化T淋巴細胞與Mtb-HAg或LPS誘導的DCs共同培養(yǎng),

5、第9 d用流式細胞儀檢測和分析T淋巴細胞增殖指數。
  結果:
  1. PTB患者(n=56)的PDC(0.91±0.10)%顯著低于 HD組(n=32)(1.62±0.14)%(P<0.05),MDC在PTB組、HD組之間無差異(P=0.17),PTB患者的MDC/PDC比值也明顯高于HD組(P<0.05)。
  2. PTB復治組(n=25)的PDC(0.63±0.09)%明顯低于初治組(n=31)(1.14±0

6、.16)%和HD組(n=32)(1.63±0.15)%(p均<0.05),但初治組與HD組之間無差異。而MDC在三組之間并無差異(P=0.08)。但是MDC/PDC比值在PTB復治組(5.30±1.35)明顯高于初治組(3.52±0.53)和HD組(1.84±0.16)(p均<0.05)。
  3.體外培養(yǎng)的單核細胞來源的DCs,經 Mtb-HAg誘導后,形態(tài)上為典型成熟的DCs,表現為細胞體積增大,不規(guī)則,細胞周邊可見較長的毛刺

7、狀突起。用熒光顯微鏡觀察發(fā)現,培養(yǎng)初期的單核細胞表達CD14,培養(yǎng)成熟后多為表達MDC標志CD11c。
  4.外周血單核細胞經rhGM-CSF和rhIL-4培養(yǎng)7 d,再經Mtb-HAg誘導2 d后,單核細胞標志 CD14小于10%,高表達成熟標記 CD83(64.45%),共刺激分子CD86(76.3%) CD80(78.87%)及 HLA-DR(76.48)%,大多數細胞表達 MDC標志CD11c(74.98)%,少數表達P

8、DC標志CD123(10.31)%。
  5.用Modift軟件分析CFSE標記純化T細胞與三組DCs混合培養(yǎng)9 d后的細胞增殖指數(PI)發(fā)現,Mtb-HAg誘導組的PI(41.47±5.64)%明顯大于陰性對照組(9.16±5.24)%,(P<0.05),與LPS誘導陽性對照組(34.71±6.21)%無差異。
  結論:
  1.與HD組相比,PTB患者DC亞群中PDC的數量明顯減少,而MDC變化不明顯,同時MD

9、C/PDC的比值也明顯升高。
  2. PTB復治組患者PDC均明顯低于初治組和HD組,MDC/PDC比值明顯高于初治組和HD組,而初治組與HD組之間無明顯差異;MDC在三組之間無差異;提示PDC數量與病情進展密切相關。
  3. Mtb-HAg可上調外周血單核細胞來源DCs的協(xié)同刺激分子和成熟標志表達,以及增強MLR反應,提示Mtb-HAg有誘導DCs成熟和增強抗原提呈功能的作用。
  4. Mtb-HAg誘導外周血

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