1、非結(jié)核分枝桿菌(NTM)是除結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)、麻風(fēng)分枝桿菌(M.leprae)外的一類分枝桿菌。NTM與MTBC均可引起肺部以及其它部位病變，而且臨床癥狀相似，鑒別診斷困難，所以分枝桿菌菌種鑒定對于疾病的診斷、治療及預(yù)后意義重大。以細(xì)菌培養(yǎng)為基礎(chǔ)的傳統(tǒng)生化鑒定方法，費(fèi)力耗時(shí)，結(jié)果提供不及時(shí)，有時(shí)結(jié)果不準(zhǔn)確。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，出現(xiàn)了眾多以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)的鑒定方法，如PCR-SSCP、PCR-RFLP、DNA探針、D

2、NA芯片、DNA直接測序等，以其快速、高效、特異等優(yōu)點(diǎn)而受到青睞。本研究采用從國內(nèi)收集的NTM分離株，探討基于hsp65和rpoB的PCR-RFLP對NTM分離株菌種鑒定的應(yīng)用價(jià)值。
　　 1、hsp65-和rpoB-PCR-RFLP在非結(jié)核分枝桿菌臨床分離株鑒定應(yīng)用中的效果評價(jià)
　　 用PNB/TCH試驗(yàn)和多位點(diǎn)PCR從臨床分離株鑒定出NTM后，以hsp65測序作為金標(biāo)準(zhǔn)，用hsp65-和rpoB-PCR-RFLP將N

3、TM鑒定至種。結(jié)果，收集的130株省級結(jié)核病院鑒定為NTM的臨床分離株中，經(jīng)我們進(jìn)一步用PNB/TCH試驗(yàn)和多位點(diǎn)PCR鑒定，22株為MTB，108株為NTM。PNB/TCH試驗(yàn)與多位點(diǎn)PCR結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。多位點(diǎn)PCR所需時(shí)間較短。108株NTM中，經(jīng)hsp65-和rpoB-PCR-RFLP鑒定為胞內(nèi)分枝桿菌53株(49.07％)、膿腫分枝桿菌23株(21.30％)、鳥分枝桿菌19株(17.59％)、馬賽分枝桿菌和戈

4、登分枝桿菌各4株(3.70％)、首爾分枝桿菌、熊本分枝桿菌、偶發(fā)分枝桿菌、乳牛分枝桿菌和莫娜分枝桿菌各1株(0.93％)。福建NTM肺病病原種類繁多，以胞內(nèi)分枝桿菌、膿腫分枝桿菌和鳥分枝桿菌為主。以hsp65基因測序結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，hsp65PCR-RFLP的敏感性為99.07％，特異性為100％，rpoBPCR-RFLP的敏感性為98.15％，特異性為100％。hsp65PCR-RFLP與rpoBPCR-RFLP結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞

5、0.05)。
　　 2、動(dòng)物標(biāo)本分枝桿菌的分離與鑒定
　　 用中和離心法消化動(dòng)物標(biāo)本，分別接種L-J培養(yǎng)基和MGIT960培養(yǎng)基進(jìn)行分枝桿菌分離培養(yǎng)。用PNB/TCH試驗(yàn)、hsp65DNA直接測序、hsp65-和rpoB-PCR-RFLP、多位點(diǎn)PCR和Spoligotyping進(jìn)行分離株菌種鑒定。從110份動(dòng)物標(biāo)本中共分離到29株抗酸桿菌，經(jīng)鑒定，19株為NTM，包括偶發(fā)分枝桿菌11株(57.89％)、膿毒分枝桿菌5株