1、目的:
　　 觀察連續(xù)性血液凈化(CBP)對(duì)嚴(yán)重膿毒癥患者Toll樣受體及炎癥介質(zhì)的影響,并探討其對(duì)膿毒癥可能的治療機(jī)制。
　　 方法:
　　 30例嚴(yán)重膿毒癥患者隨機(jī)分入常規(guī)治療組和CBP治療組,每組各15例。另選15名健康志愿者做為正常對(duì)照組。常規(guī)治療指原發(fā)病的治療、抗生素、血管活性藥物、營(yíng)養(yǎng)對(duì)癥支持治療、維持水電解質(zhì)酸堿平衡及機(jī)械通氣等治療；CBP治療指在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合CBP治療,選擇高通量血液濾過(guò)(

2、HVHF)模式,置換量設(shè)為4 L/h。兩治療組在治療前及治療24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),取血液樣本,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)表面Toll樣受體-2(TLR2)和Toll樣受體-4(TLR4)的蛋白表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)血清炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的濃度。并于治療前及治療第2、5、8天記錄患者的急性生理和慢性健康狀況(APA

3、CHE)Ⅱ評(píng)分。
　　 半定量RT-PCR法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的變化:密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,以Trizol提取液提取外周血單個(gè)核細(xì)胞總RNA,用半定量RT-PCR法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的變化。
　　 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞表面TLR2/4蛋白表達(dá)的變化:在各時(shí)間點(diǎn),采血后立即分離PBMC,即刻上機(jī)檢測(cè)。
　　 ELISA法檢測(cè)血清炎癥介質(zhì)TN

4、F-α、IL-6、IL-10的濃度變化:在各時(shí)間點(diǎn)采集外周血,離心、分離血清后,-80℃保存待測(cè)。ELISA試劑盒由博士德公司提供,實(shí)驗(yàn)過(guò)程按說(shuō)明書(shū)操作。
　　 統(tǒng)計(jì)方法:使用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、嚴(yán)重膿毒癥患者與正常對(duì)照組TLR2/4及炎癥介質(zhì)相比較:嚴(yán)重膿毒癥患者TLR2/4的mRNA與蛋白表達(dá)以及TNF-α、IL-6、IL-10的濃度水

5、平,均明顯高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TLR2/4的mRNA與蛋白表達(dá)之間具有正相關(guān)性。
　　 2、兩治療組嚴(yán)重膿毒癥患者間年齡、性別及APACHEⅡ評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩治療組治療前相比較,TLR2/4及TNF-α、IL-6、IL-10的濃度水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3、兩治療組治療前后單個(gè)核細(xì)胞表面TLR2/4蛋白表達(dá)變化情況:常規(guī)治療組TLR2/4蛋白表達(dá)隨治療

6、時(shí)間的延長(zhǎng),呈緩慢下降趨勢(shì),直到治療72h,其P值才<0.05,出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CBP治療組TLR2/4蛋白表達(dá)隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)顯著下降,各治療期與治療前相比,P值均<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CBP治療組TLR2/4蛋白表達(dá)均低于同期常規(guī)治療組,P值均<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、兩治療組治療前后炎癥介質(zhì)濃度變化情況:常規(guī)治療組TNF-α、IL-6、IL-10以及CBP治療組IL-10的濃度,各治療期與治療前相比

7、,P值均>0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CBP治療組TNF-α、IL-6的濃度,在治療24 h時(shí)明顯下降,與治療前相比P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,此后維持在較高水平。與常規(guī)治療組同期相比,CBP各治療期TNF-α、IL-6均明顯下降,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:兩治療組同期IL-10的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 5、兩治療組治療前后APACHEⅡ評(píng)分比較:兩治療組均不同程度降低了患者的APACHEⅡ評(píng)分,CB