1、利用懸浮培養(yǎng)植物細胞技術(shù)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物是目前最有前景的研究方向之一，而誘導能有效促進次生代謝產(chǎn)物合成，并以其便利性、經(jīng)濟性和高效性得到了廣泛的研究和應用。本文以p-ERK和ROS為指標，從信號分子水平探究了誘導子加入時間與作用效果之間的關(guān)系，為闡明誘導子在不同培養(yǎng)時期產(chǎn)生不同誘導效應的機制奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1.分別應用Western免疫印記法和熒光DCFDA法檢測了紅豆杉細胞在細胞培養(yǎng)周期中胞內(nèi)p-ERK和ROS的表

2、達情況。結(jié)果表明細胞培養(yǎng)周期中p-ERK和ROS的活性變化呈“M”形，時序上p-ERK先于ROS。 2.用1mM Ce4+誘導培養(yǎng)各時期的紅豆杉細胞，檢測誘導后胞內(nèi)p-ERK活性以及ROS含量的變化情況，我們發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)時期的紅豆杉細胞對同樣的誘導能產(chǎn)生不同的應答反映。根據(jù)誘導效果的不同，可將細胞培養(yǎng)分為三個時期：培養(yǎng)第1～8d：細胞經(jīng)誘導后產(chǎn)生長效、強烈的p-ERK、ROS表達；培養(yǎng)第9～15d：細胞經(jīng)誘導后產(chǎn)生短效、強烈的p

3、-ERK、ROS表達；培養(yǎng)第16～25d：細胞經(jīng)誘導后產(chǎn)生長效、較弱的p-ERK、ROS表達。因此從信號水平變化特點來看，培養(yǎng)第9～15d的細胞最適于誘導，尤其以培養(yǎng)第9～11d效果最好。 綜上所述，不同培養(yǎng)時期紅豆杉細胞經(jīng)Ce4+誘導后p-ERK和ROS表達的不同變化特征可能是不同培養(yǎng)時期誘導子作用效果不同的原因。對培養(yǎng)第9～11d的紅豆杉細胞進行誘導能迅速、顯著地提高信號強度,且短效的信號有利于細胞活力的恢復，可能是這個時期