1、華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文利用siRNA技術(shù)抑制人黑色素瘤細(xì)胞酪氨酸酶活性的研究姓名：叢蓉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：錢旻20070501華東師范大學(xué)2007屆碩士研究生畢業(yè)論文結(jié)果：通過兩步PCR的方法成功地?cái)U(kuò)增獲得了三條TYRsiRNA及其負(fù)對(duì)照表達(dá)框架。體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：(1)在體外水平上，siTYR1、siTYR2、siTYR3、siTYR1，2，3混合物及各組負(fù)對(duì)照表達(dá)框能在A375細(xì)胞中得到有

2、效表達(dá)，其轉(zhuǎn)染效率從5％至50％不等，基本上滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的要求；細(xì)胞毒性檢測結(jié)果顯示TYRsiRNA表達(dá)框架及其負(fù)對(duì)照均能抑制A375細(xì)胞的生長，且呈顯著的劑量依賴關(guān)系；與空白對(duì)照組相比，三組轉(zhuǎn)染siTYR及其負(fù)對(duì)照表達(dá)框的A375細(xì)胞的體外遷移能力及粘附能力均明顯減弱；酪氨酸酶活性及黑色素含量測定結(jié)果表明：各組TYRsiI礬A表達(dá)框均能明顯抑制A375細(xì)胞的酪氨酸酶活性及黑色素含量，且呈顯著的劑量依賴關(guān)系。將各組TYRsiRNA與其

3、相應(yīng)負(fù)對(duì)照的酪氨酸酶活性及其黑色素含量進(jìn)行等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：只有siTYR3與其負(fù)對(duì)照組差異顯著(pO05)。(2)在體內(nèi)水平上，成功地構(gòu)建了荷人黑色素瘤細(xì)胞A375的荷瘤裸鼠動(dòng)物模型，瘤內(nèi)注射TYRsiRNA表達(dá)框架后結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染siTYR1負(fù)對(duì)照、siTⅥt2、siTYR2負(fù)對(duì)照、siTYR3負(fù)對(duì)照、siTYR1，23組其腫瘤體積及瘤重明顯減小(po05)，其余各組與空白對(duì)照組相比其腫瘤體積及瘤重?zé)o顯

4、著差異(滬005)；熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示TⅥtsiRNA表達(dá)框架能夠在瘤內(nèi)得到有效表達(dá)；酪氨酸酶活性及黑色素含量檢測結(jié)果均顯示，與空白對(duì)照組相比，siTYR1、siTYR2、siTYR一3、siTYR1，2，3及其負(fù)對(duì)照酪氨酸酶活性及黑色素含量均無顯著變化。結(jié)論：(1)成功地?cái)U(kuò)增獲得了三條TYRsiRNA及其負(fù)對(duì)照表達(dá)框架(2)在體外細(xì)胞水平上，各TYRsiRNA表達(dá)框架對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞株A375的酪氨酸酶活性及其黑色素含量有一定的抑