1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾Survivin基因?qū)Υ竽c癌Lovo細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響姓名：熊英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系統(tǒng)疾?。┲笇?dǎo)教師：郭文20070508中文摘要酸突出末端的19～23nt的小分子干擾核糖核酸(smallinterferenceRNA，siRNA)或短發(fā)夾RNA(shothairpinRNA，shRNA)，作為RNAi的中介分子，通過(guò)序列互補(bǔ)配對(duì)法則特異性降解目的基因，抑制序列特異性的基因表達(dá)。R

2、NA干擾技術(shù)具有高度序列特異性特征，能夠識(shí)別正常和變異基因副本間在單個(gè)核苷酸上的差別，并在此基礎(chǔ)上對(duì)正常和變異基因作出區(qū)分，最終只“敲除”變異基因，麗不影響正?；虻墓δ堋Ａ硗?，還具有高效性特征，RNAi存在瀑布放大效應(yīng)，每個(gè)細(xì)胞僅需幾分子siIⅢA就可產(chǎn)生RNAi效應(yīng)，并可達(dá)到缺失突變體表型的程度。相比普通的siRNA，具有短發(fā)卡結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA，穩(wěn)定性比siRNA更好，而且能增加阻斷基因表達(dá)的時(shí)問(wèn)。本研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)將靶向Su

3、rvivin基因的siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大腸癌離體細(xì)胞株Lovo，觀察Lovo細(xì)胞Survivin基因表達(dá)情況后，根據(jù)siRNA序列設(shè)計(jì)、合成shRNA并構(gòu)建shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染Lovo細(xì)胞并篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后，檢測(cè)穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞的生長(zhǎng)周期和增殖情況。研究目的在于給大腸癌Survivin基因治療的可行性提供依據(jù)。方法一、設(shè)計(jì)靶向Survtvin基因的$iRNA，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大腸癌離體細(xì)胞Lovo，觀察Survivia基因的表達(dá)

4、情況1siRNA的設(shè)計(jì)應(yīng)用siRNA設(shè)計(jì)軟件初篩出9對(duì)，再進(jìn)行BLAST分析剔除與其他編碼同源性的siRNA，最后經(jīng)RNA結(jié)構(gòu)分析軟件分析將對(duì)應(yīng)的基因序列位于二級(jí)結(jié)構(gòu)的siRNA篩除，選出2對(duì)靶向Survivin的姍(SurvivinsiRNA1和SurvivinsiRNA2)。2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大腸癌Lovo細(xì)胞采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將SurvivinsiRNA轉(zhuǎn)染Lovo細(xì)胞，轉(zhuǎn)染72小時(shí)后進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。3各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)用realtimeRTP